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淡色库蚊抗药性相关新基因--视蛋白基因的克隆与分析
目的:获取淡色库蚊抗药性相关视蛋白基因(NYD-OP)全长cDNA序列.方法:根据抑制性差减杂交(SSH)结合cDNA芯片分离获得的淡色库蚊抗药性相关视蛋白基因的289 bp片段,设计上、下游引物,分别以cDNA文库和反转录二链产物为模板,采用快速扩增cDNA末端法(rapid amplification of cDNA end,RACE)扩增视蛋白基因5′、3′端,经对位拼接获得全长序列,并用相应的软件进行分析.结果:获得6个淡色库蚊视蛋白基因全长序列,开放阅读框分别为1116 bp(GeneBank/NCBI AY297441,AY297442)及1119 bp(GeneBank/NCBI AY297443,AY297444,AY299337,AY299338),以上序列经推导分别编码371及372个氨基酸.进行蛋白质序列分析,与烟草天蛾视蛋白的同源性是77%.结论:获得6个淡色库蚊抗药性相关视蛋白基因全长cDNA序列.
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视蛋白基因启动子的克隆和鉴定
目的克隆出视蛋白基因启动子.方法以小鼠全基因组为模板,用PCR法克隆出目的大小的片断.然后连接到T-载体上作酶切鉴定,后测序.结果酶切结果与预期相符,测序结果与公布序列完全一致.结论视蛋白基因启动子克隆成功.