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2012～2013年北京市怀柔区淡色库蚊抗药性研究
目的 了解北京市怀柔区的淡色库蚊对常用杀虫剂的抗药性水平,为合理使用杀虫剂提供科学依据.方法 采用幼虫浸渍法测定淡色库蚊四龄幼虫的半数致死浓度(LC50).结果 2012年怀柔区野外品系淡色库蚊对敌敌畏、双硫磷、高效氯氰菊酯、溴氯菊酯的抗性倍数分别为15.36、10.33、9.06和10.57倍;2013年野外品系淡色库蚊对上述杀虫剂的抗性倍数分别为15.74、10.96、9.4和10.75倍.结论 怀柔区的淡色库蚊对4种药物均产生不同程度的抗药性,但以敌敌畏、溴氯菊酯为高.
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2012年北京市西城(南)区淡色库蚊抗药性监测
目的 了解北京市西城(南)区淡色库蚊的抗药性情况,为蚊虫防制工作提供指导.方法 采用幼虫浸渍法检测淡色库蚊野外品系和敏感品系四龄幼虫对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯、仲丁威、双硫磷、敌敌畏等5种杀虫剂的抗性.结果 与敏感品系相比较,从西城(南区)采集到的淡色库蚊野外品系对高效氯氰菊酯、敌敌畏、仲丁威等3种药物相对敏感,对于双硫磷、溴氰菊酯较不敏感.结论 西城(南)区淡色库蚊对双硫磷、溴氰菊酯已产生抗性,应谨慎使用.
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2010-2012年北京市密云县淡色库蚊抗药性监测结果分析
目的 了解北京市密云县淡色库蚊的抗药性情况,为蚊虫防制工作提供指导.方法 采用幼虫浸渍法检测淡色库蚊野外品系和敏感品系四龄幼虫对杀虫剂的抗药性.结果 与敏感品系相比较,从密云县采集到的淡色库蚊野外品系对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯、仲丁威、双硫磷、敌敌畏的抗性倍数分别为88.7、1.88、245、9.69和3.62倍.结论 淡色库蚊幼虫对上述5种药物均产生不同程度抗药性,以仲丁威、高效氯氰菊酯为高.
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几种鬼臼毒素类物质生物活性的研究
目的研究4种鬼臼毒素类似物对3龄初淡色库蚊幼虫和5龄初菜青虫的毒杀和生长发育抑制活性.
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北京台湖地区淡色库蚊对3种常用杀虫剂的抗药性及kdr基因多态性研究
目的 了解北京台湖地区淡色库蚊对常用杀虫剂的抗药情况和当地淡色库蚊kdr基因多态性,为该地区淡色库蚊防治提供科学指导.方法 采用幼虫浸渍法对氯菊酯、残杀威和毒死蜱进行抗药性生物检测,以等位基因特异性PCR(AS-PCR)为检测方法确定当地淡色库蚊kdr基因型的频率.结果 当地淡色库蚊对氯菊酯、残杀威和毒死蜱的抗性系数分别为15.9、4.2和3.6;当地淡色库蚊中kdr基因存在一种突变(L1014F型),突变基因占基因总数的25.7％.结论 北京台湖地区的淡色库蚊已对氯菊酯产生较强抗性,建议在以后的防治工作中通过杀虫剂的复配和交替用药达到蚊虫防治目的.
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烟台口岸淡色库蚊中检测到库蚊黄病毒
目的 监测烟台口岸淡色库蚊携带黄病毒情况.方法 在烟台口岸采集淡色库蚊,用RT-PCR方法检测库蚊黄病毒,采用MEGA 5.0软件进行遗传距离计算和系统发育分析,确定该病毒的基因型.结果 从烟台口岸90组淡色库蚊中的1组,扩增到库蚊黄病毒核酸,序列分析证实为库蚊黄病毒.系统发育分析显示与分离自山东东明的病毒株(JQ518484.1)遗传关系近,相似度达98％.该病毒分型为基因Ⅰ型.结论 烟台口岸淡色库蚊中检测到库蚊黄病毒,应加强蚊虫携带病原体的监测.
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基于秩和比的水质理化指标对淡色库蚊幼虫密度影响因素分析
目的 分析污水处理试验系统各处理单元水质理化指标对淡色库蚊幼虫密度影响.方法 采集某市2015年和2016年污水处理试验系统的湿地1和湿地2出水池﹑河岸带1～3出水池和浮床1～4出水池5个处理单元(分别以数字1～9表示)水样,检测总氮﹑总磷﹑化学需氧量﹑五日生化需氧量和总有机碳等理化指标,并计算综合污染指数,同时检测不同年度各处理单元的蚊幼虫密度,应用基于秩和比的YXj因素筛选方法分析水质理化指标对淡色库蚊幼虫密度影响程度.结果 影响蚊幼虫密度的6个水质理化指标由大到小排序依次为总磷﹑五日生化需氧量﹑综合污染指数﹑总有机碳﹑化学需氧量和总氮,且差异有统计学意义(P均<0.01).结论 污水处理试验系统各处理单元的各个水质理化指标均为影响淡色库蚊幼虫密度的重要因素,采取相应措施控制蚊幼虫密度.
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杀虫剂与八氯二丙醚(S2)复配杀灭现场淡色库蚊效果观察
目的为了延缓和克服蚊虫抗性的发生和发展,更好地选用卫生杀虫剂,控制媒介蚊虫,测定了山东省部分地区现场淡色库蚊对常用杀虫剂与八氯二丙醚(S2)混用的敏感性.方法采用WHO生物测试法,计算LC50、回归方程、增效系数.结果残杀威+S2、氯氰菊酯+S2、DDVP+S2复配增效系数分别在2.19～9.49之间、1.71～3.96之间和3.20～20.72之间,显示出较好的增效作用.结论当淡色库蚊产生抗药性后,采用杀虫剂与八氯二丙醚混用的方法,能取得较好效果.
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浙江省淡色库蚊钠离子通道基因单链构象多态性分布特征研究
目的 了解浙江省不同地区淡色库蚊钠离子通道(vssc)基因多态性分布特征.方法 采集杭州、舟山、湖州、金华等市区淡色库蚊样本,PCR扩增vssc基因片段,扩增产物进行基因单链构象多态性(single strand conformation polymorphism,SSCP)分析.对不同的SSCP型进行测序,并进行氨基酸序列预测.结果 四地市淡色库蚊现场品系以及敏感品系vssc基因片段经SSCP分析共发现7个SSCP型,分别属于3个不同的氨基酸序列型,即野生型、L1014S突变型以及L1014F突变型.结论 浙江省淡色库蚊t,ssc基因存在较高的多态性,使其在面对菊酯类等相关杀虫剂选择压力时具有较高的耐受度,进而可能会增大相关杀虫抗性防制的难度.
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杭州地区淡色库蚊抗药性调查
目的 了解杭州地区淡色库蚊的抗药性情况,为杭州市灭蚊工作提供指导.方法 采用浸渍法检测杭州地区淡色库蚊现场品系和敏感品系 4 龄幼虫对敌敌畏、三氯杀虫酯、残杀威、溴氰菊酯、高效氯氰菊酯、丙烯菊酯等 4 类 6 种杀虫剂的抗性.结果 杭州地区淡色库蚊现场品系与敏感品系相比较,溴氰菊酯抗性倍数高,为 5.30 倍;其次是残杀威,2.91 倍;三氯杀虫酯,1.92 倍;其余 LD50 近于敏感品系;高效氯氰菊酯与敏感品系比较抗性降低,抗性倍数为 0.43 倍.结论 本次监测的杀虫剂杭州市区蚊虫对高效氯氰菊酯抗性低于敏感品系,其余均为低抗性或接近敏感品系.
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杀虫剂复配对现场淡色库蚊的杀灭效果
目的 探讨杀虫剂复配对现场淡色库蚊的杀灭效果,为合理有效地进行蚊虫化学防治提供依据.方法 参照WHO生物测定方法和唐振华药物联合作用试验方法.结果 对于DDVP、残杀威、氯氰菊酯、三氯杀虫酯4种化学杀虫剂,两种作用机制不同的杀虫剂复配对三个现场种群淡色库蚊均起到明显的杀虫增效作用,两种作用机制相同的杀虫剂复配对三个现场种群淡色库蚊均无明显的杀虫增效作用.结论 作用机制不同的杀虫剂复配可对蚊虫起到明显的杀虫增效作用,作用机制相同的杀虫剂复配对蚊虫无明显的杀虫增效作用,选择杀虫效力较强的配方可提高蚊虫防治效果.
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白僵菌对不同生境淡色库蚊的致病力研究
为了测定球孢白僵菌对不同生境淡色库蚊幼虫的致病力，为白僵菌应用于蚊虫的生物防治提供参考依据，从济宁市唐口镇医院污水（A组）、市郊区养猪场废水沟（B组）、微山湖稻区排水沟（C组）、山东省寄生虫病防治研究所院内水缸（D组）中采集的蚊虫直接用于致病力研究，室内饲养蚊虫作为对照组（E组）。利用白僵菌的孢子悬浮液处理不同栖境的淡色库蚊幼虫，记录幼虫死亡数，计算各处理组幼虫的致死中时LT50。结果显示，经白僵菌处理后，淡色库蚊幼虫均有不同程度的死亡率，试验10 d后，淡色库蚊幼虫的累计死亡率均达95％以上。 A、 B、 C、 D、 E 组幼虫的致死中时 LT50分别为：6.2、6.4、5.7、5.8、3.8 d，野外采集蚊虫比室内饲养蚊虫的死亡高峰期推迟2～3 d。结果表明白僵菌有望应用于蚊虫的生物防治中。
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上海市冬季尖音库蚊复合组现状初步研究
为研究上海市冬季尖音库蚊复合组生态学,2012年12月中旬至2013年3月中旬,在上海市7个区县(3个郊区,4个市区),每旬开展一次冬季尖音库蚊复合组调查.结果发现郊区和市区地上建筑的尖音库蚊复合组进入越冬状态,而市区地下建筑的尖音库蚊属相当一部分没有进入越冬状态,且市区地下建筑的尖音库蚊复合组吸血率与郊区和市区地上建筑越冬的蚊虫没有显著差异.
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淡色库蚊(Culex pipiens Pallens)与击倒抗性(kdr)相关的钠通道基因突变
本研究采用RT-PCR技术,使用简并引物分别从淡色库蚊(Culex pipiens pallens)敏感品系和抗溴氰菊酯品系中扩增出钠通道ⅡS4～ⅡS6区域的基因片段,长度为359bp.该基因片段所编码的氨基酸与黑尾果蝇(Drosophila melanogaster)、家蝇(Musca domestica)、埃及伊蚊(Aedes aegypti)、冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)及德国小蠊(Blattella germanica)等昆虫相应区域的氨基酸序列具有较高的同源性,其同源性分别为95.8%,95.0%,100.0%,98.3%和95.0%.经序列比对,确认抗溴氰菊酯品系淡色库蚊钠通道基因在1014位点发生了突变:该位点的碱基"A"突变为"T",其对应氨基酸由亮氨酸(L)变为苯丙氨酸(F),该突变(L1014F型)在多种昆虫中较为常见.
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城市蚊虫综合治理前后种类组成的研究
为科学有效开展城市灭蚊,采用诱蚊灯法研究城市蚊虫种类的主要组成和综合治理前后种类组成的变化,结果显示在南京城区监测到淡色库蚊(Culex pipiens pallens)、三带喙库蚊(Culex tritaeniorhynchus)、白纹伊蚊(Aedes albopictus)、中华按蚊(Anopheles sinensis)4种蚊种,分别占32.9％、62.0％、2.4％和2.7％；无论是对照区还是试验区,淡色库蚊和三带喙库蚊所占比例均分别超过30％和60％.从季节变化来看,从7月到9月上旬,三带喙库蚊所占比例高于淡色库蚊；从9月下旬开始,三带喙库蚊数量减少,所占比例开始下降.比较对照区和试验区,2006年淡色库蚊和三带喙库蚊的构成比两者差异均没有显著性意义(P＞0.05).未发现三带喙库蚊孳生地.不能忽视三带喙库蚊可能对城市居民带来的危害,除淡色库蚊和白纹伊蚊外,三带喙库蚊也应作为城市蚊虫防治的重点对象.
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淡色库蚊不敏感乙酰胆碱酯酶与抗药性关系的研究
经过选育的淡色库蚊抗敌敌畏(Rd)、抗残杀威(Rp)、抗氯氰菊酯(Rc)品系及其降解品系(Rd降解、Rp降解、Rc降解)的抗性水平分别为敏感(S)淡色库蚊品系的12.17倍、11.21倍、534.31倍、6.10倍、8.38倍、83.26倍,不敏感乙酰胆碱酯酶蚊虫个体频率分别为49.47%、73.47%、4.76%、17.71%、42.86%、3.57%,S淡色库蚊品系不敏感乙酰胆碱酯酶个体频率为4.65%.表明淡色库蚊对敌敌畏和残杀威的抗性伴随着不敏感乙酰胆碱酯酶蚊虫个体频率的改变,而对氯氰菊酯的抗性不伴随着不敏感乙酰胆碱酯酶蚊虫个体频率的改变.
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淡色库蚊对拟除虫菊酯(溴氰菊酯、Es-生物丙烯菊酯)抗药性品系现实遗传力的研究
分别使用溴氰菊酯和Es-生物丙烯菊酯在实验室条件下对淡色库蚊(Culex Pipiens Pallens)北京株连续筛选11代(分别命名为DEL品系和EBT品系).采用Tabashnik的方法,计算了2种品系的抗药性现实遗传力(h2)和表现型标准差(δp)并对其抗药性发展速率作分析预测.结果表明,筛选至11代时,DEL和EBT品系的抗药性指数分别为372.71和40.45.DEL品系的抗药性现实遗传力(h2=0.32356)和表现型标准差(δp=0.48763)均高于EBT品系(h2=0.22013,δp=0.33058).在实验室条件下,DEL品系抗药性发展速率显著快于EBT品系,其抗药性上升潜力大于EBT品系.淡色库蚊自然种群对Es-生物丙烯菊酯不易产生高抗药性,但对溴氰菊酯易产生高抗药性.
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淡色库蚊对一些化合物的触角电生理及行为反应
本文利用触角电位技术和嗅觉仪测试了几种气味化合物对淡色库蚊雌蚊的触角电生理和行为影响.触角电生理结果显示,淡色库蚊雌蚊对L-乳酸、苯甲醛和氨水产生明显的触角电位反应.且对苯甲醛和氨水的触角电位反应呈正相关.L-乳酸在1μL/mL剂量时产生大的触角电位反应;氨水在10 μL/mL剂量引发了大的触角电位反应;淡色库蚊雌蚊对α-蒎烯4个剂量的刺激没有产生明显的触角电位反应.行为实验结果显示,氨水在10 μL/mL时对淡色库蚊雌蚊产生明显的吸引作用;苯甲醛和壬醛显示出潜在的驱避作用,两者的反应率在1μL/mL和10μL/mL剂量仅10%左右;L-乳酸、苯甲酸、壬酸和α-蒎烯在测试剂量下都没有对淡色库蚊雌蚊产生明显的引诱作用.
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荧光定量PCR快速检测淡色库蚊击倒抗性相关钠通道基因突变(L1014F)
本研究的目的是采用荧光定量PCR扩增技术,建立快速检测淡色库蚊Culex pipiens pallens钠离子通道L1014位点击倒抗性(Knockdown resistance,kdr)相关点突变方法,该方法的原理是以突变位点为3′端设计两条特异性上游引物,和一条非特异下游引物组成两对引物平行双管法,用荧光定量PCR扩增快速检测淡色库蚊钠通道L1014F突变的SS,SR,RR 3种基因型.用此方法对48个北京淡色库蚊样本进行基因分型,42个样本检测结果与等位基因特异性PCR(AS-PCR)检测结果完全一致,得到SS(TTA/TTA)基因型21个,占50.0%,SR(TTA/TTT)基因型16个,占38.1%,RR(TTT/TTT)基因型5个,占11.9%,与测序结果完全一致;另外6个样本检测结果与AS-PCR检测结果不一致,测序显示:TCA(L1014S)、TTC(L1014F)突变各1株,另4株为敏感纯合子.因此,PCR SYBR GREEN 扩增灵敏度(93.75%)低于AS-PCR法(100%),但特异性较高,达100%;分析原因可能是被检测样本引物结合部位多态性较高,影响了引物的结合,而AS-PCR凭经验能完成部分结果的判断.综上所述,用PCR SYBR GREEN 扩增技术快速检测淡色库蚊的L1014F基因突变仍是一种值得采纳的等位基因分型方法.
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自然种群淡色库蚊钠通道基因全长的克隆及序列分析
本研究采用反转录多聚酶链式反应（ RT-PCR）的方法对野外采集的河北种群淡色库蚊的钠离子通道基因进行了克隆和序列分析。得到的克隆序列与GenBank中公布的序列能够吻合，说明成功克隆出淡色库蚊的钠通道基因全长，为抗性突变的研究奠定了基础。本研究在淡色库蚊钠通道基因上发现了多处氨基酸突变（A32T、 T336A、 S342P、 K535E、 L1035F、 N1595S和F1982L）和7处可变剪接。其中，包括经典的抗性突变L1014F （ L1035F）。但这些突变和可变剪接与蚊虫抗性的关系有待进一步研究。
