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烟台口岸淡色库蚊中检测到库蚊黄病毒
目的 监测烟台口岸淡色库蚊携带黄病毒情况.方法 在烟台口岸采集淡色库蚊,用RT-PCR方法检测库蚊黄病毒,采用MEGA 5.0软件进行遗传距离计算和系统发育分析,确定该病毒的基因型.结果 从烟台口岸90组淡色库蚊中的1组,扩增到库蚊黄病毒核酸,序列分析证实为库蚊黄病毒.系统发育分析显示与分离自山东东明的病毒株(JQ518484.1)遗传关系近,相似度达98％.该病毒分型为基因Ⅰ型.结论 烟台口岸淡色库蚊中检测到库蚊黄病毒,应加强蚊虫携带病原体的监测.
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山西省运城市2012年蚊媒病毒的分离鉴定
目的 了解山西省运城市蚊虫及蚊媒病毒的种类和分布.方法 2012年8月在山西省运城市临猗县和永济市采集蚊虫标本,经鉴定分类和分批研磨后,利用细胞(C6/36和BHK21)培养方法分离病毒,对阳性分离物使用蚊媒病毒种属特异引物进行RT-PCR扩增鉴定.结果 采集4属7种10455只蚊虫,临猗县和永济市优势蚊种分别为淡色库蚊(91.96％)和三带喙库蚊(72.85％).经鉴定分析,从标本中分离到15株基因I型乙型脑炎病毒(JEV)、4株库蚊黄病毒(CxFV)、3株淡色库蚊浓核病毒(CppDNV)和1株盖塔病毒(GETV).结论 首次从山西省分离GETV和CxFV;三带喙库蚊仍是运城市优势蚊种,目前当地自然循环的JEV仍以基因I型为主.
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辽宁发现库蚊黄病毒
2011年从辽宁省丹东地区蚊虫样品中分离到6株病毒,采用逆转录-聚合酶链式扩增(RT-PCR)检测方法,结果黄病毒属通用引物和库蚊黄病毒特异性引物均为阳性.6株病毒核苷酸序列经基因库(GenBank)比对后,证实6株病毒为库蚊黄病毒,为我国首次报道.将病毒NS5基因和E基因核苷酸序列与GenBank中10株库蚊黄病毒参考毒株核苷酸序列进行比较,并构建遗传进化树,结果显示本次分离的6株病毒与美国和日本的毒株亲缘关系较近.
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首次从我国蚊虫中分离到类似广平病毒
为掌握云南省西双版纳州勐海县蚊媒病毒分布状况,用诱蚊灯采集蚊虫标本,用细胞培养法分离病毒,对阳性分离物进行分子生物学鉴定.2012年7月,在勐海县打洛镇采集蚊虫32批共1 468只,其中三带喙库蚊(Culextritaeniorh ynchus)28批1 383只,致倦库蚊(Culex quinque ascitatus)2批66只,按蚊(Anopheles)2批19只.用金黄地鼠肾细胞(Golden hamster kidney cell,简称BHK-21)和白纹伊蚊细胞(Aedes albopictus cell,简称C6/36)进行病毒分离,结果有2批三带喙库蚊标本(BNDL1205和BNDL1227)能引起C6/36细胞产生聚合病变,而不能引起BHK-21细胞病变.用黄病毒属特异性引物对这2株阳性分离物进行RT-PCR,扩增得到800bp左右的条带并进行核苷酸序列测定.对核苷酸序列的系统进化分析表明,这2株病毒与分离自越南的广平病毒(Quang Binh virus,QBV) VN 180株亲缘性近,处在同一进化分支;与VN180株的核苷酸同源性分别为83.4％和82.9％,而与既往国内外分离的18株蚊虫黄病毒的核苷酸差异较大.结果表明BNDL1205和BNDL1227病毒为类似QBV,此为国内首次报道.
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甘肃省河西走廊地区2011年蚊虫种类及虫媒病毒调查研究
目的 调查甘肃省河西走廊地区蚊虫种类及所携带虫媒病毒分布状况.方法 使用诱蚊灯于18:00至次日06:00进行蚊虫标本采集,分类鉴定后液氮保存并运送至实验室备检；通过组织培养法分离病毒,并对病毒分离物进行血清学和分子生物学鉴定；利用生物信息学技术对新分离病毒的序列进行分析,完成同源性和系统发生分析.结果 2011年8月在甘肃省河西走廊地区7个县(市)共采集到蚊虫标本3属6种24 028只,其中刺扰伊蚊多,占采集总数的32.80％(7880/24 028),淡色库蚊占30.26％ (7272/24 028)；通过细胞培养分离到1株可以引起两种细胞(BHK-21和C6/36细胞)病变的病毒分离株(GS11-155)；此外在32批蚊虫标本中检测到病毒(库蚊黄病毒、盖塔病毒、辽宁病毒)基因阳性,对其中11批核苷酸序列测定和分析发现,1批为蚊传黄病毒,3批为盖塔病毒,7批为辽宁病毒.结论 甘肃省河西走廊地区优势蚊种为刺扰伊蚊,且蚊虫携带多种虫媒病毒,包括蚊传黄病毒、盖塔病毒和辽宁病毒.
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利用深度测序技术发现新疆库蚊黄病毒
目的：对我国新疆地区蚊虫携带的病毒类群进行调查，并快速发现医学重要的蚊媒病毒。方法利用Illumina深度测序技术筛查野生库蚊体内的病毒源性RNA，利用RT-PCR进行验证，通过序列比对分析病毒亲源关系。结果深度测序技术共检出144条库蚊黄病毒特异性读序，拼接获得7个不连续的病毒基因组重叠群片段。 RT-PCR扩增产物能够覆盖重叠群间隙序列。在此基础上，重构获得病毒基因组5′和3′末端片段（约678 nt、411 nt）。对5′末端序列比对分析结果表明，新疆库蚊黄病毒属于北美/亚洲基因亚型，与国内发现的库蚊黄病毒共同形成一个独立分支，核苷酸序列同源性为98．2％～99．5％，氨基酸序列同源性高于95．5％。结论深度测序技术成功应用于新疆地区虫媒病毒的快速甄测，首次从新疆地区发现库蚊黄病毒，为虫媒病毒监测提供了一条新途径。
