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人膜连蛋白A2基因重组慢病毒载体的构建及其在肝癌细胞株中的表达
目的:构建重组慢病毒载体pWPT-ANXA2-Flag,并检测其在小鼠肝癌细胞系Hepa 1-6的表达情况.方法:利用DNA重组技术将人膜连蛋白A2(annexin A2,ANXA2)基因克隆人慢病毒表达载体pWPT中,通过酶切、测序验证后,将重组慢病毒载体pWPT-ANXA2-Flag与包装质粒pCMV-dR8.91、pCMV-VSV-G共转染人胚肾上皮细胞株293T,包装重组慢病毒LV-ANXA2-Flag,并感染小鼠肝癌细胞株Hepa 1-6,用RT-PCR检测ANXA2 mRNA转录水平,Western blot法检测ANXA2-Rag蛋白的表达情况,应用流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果:经酶切及测序结果证实,构建了重组慢病毒载体pWPT-ANXA2-Flag;RT-PCR及Western blot结果显示慢病毒感染Hepa 1-6细胞后,ANXA2基因能够在细胞内正确的转录、翻译并稳定表达ANXA2蛋白;经过LV-ANXA2-Flag感染后,Hepa 1-6细胞S期细胞比例明显高于对照细胞.结论:成功建立ANXA2基因慢病毒表达载体pWPT-ANXA2-Flag,包装的慢病毒能够成功感染小鼠肝癌细胞系Helm 1-6,并使ANXA2基因得以稳定表达,并通过ANXA2促进肿瘤细胞增殖.
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子宫内膜异位症患者在位内膜与异位内膜中膜连蛋白A2的表达
目的 探讨膜连蛋白A2(AnnexinA2)在健康女性子宫内膜及子宫内膜异位症(EMS)患者在位内膜、异位内膜中的表达差别.方法 对正常内膜组、EMs患者在位内膜和EMs患者异位内膜三组进行免疫组织化检查和Western blot检测,观察三组标本切片的阳性染色情况,分析其光密度值.结果 AnnexinA2主要在内膜的间质和腺体上皮细胞的细胞核表达,而且在子宫内膜异位症患者在位内膜和异位内膜中的表达强度均低于正常内膜组(P＜0.05);在位内膜和异位内膜患者的信号表达强度比较差异未见统计学意义(P＞0.05).结论 AnnexinA2有可能参与子宫内膜异位症的发展过程,且在发展过程中起着不可缺少的作用.
