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  • pTRUF11-GFP-Bip载体的构建及真核表达鉴定

    作者:曾凡强;程宇涵;王德广

    目的 构建Bip蛋白真核表达重组体用于缺血性脑损伤机制的研究.方法 用RT-PCR方法获得Bip的cDNA;与TOPO载体连结,连接产物转化大肠杆菌DH5α进行筛选、序列测定;Bip cDNA片段亚克隆到真核表达载体pTRUF11-GFP;重组体pTRUF11-GFP-Bip转到293H细胞,Western blot鉴定Bip的表达.结果 ①经RT-PCR法得到了Bip的双链cDNA;②Bip测序图谱与GeneBank报道完全一致;③酶切鉴定能观察到Bip和pTRUF11-GFP两条带;④Western blot检测pTRUF11-GFP-Bip能表达Bip蛋白.结论 获得了能真核表达Bip蛋白的重组体.

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