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全骨髓法培养大鼠骨髓间充质干细胞及其生物学特性
目的 建立一种简便有效的体外分离纯化及培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞(MSC) 的方法,研究MSC的生物学特性.方法 贴壁培养法分离纯化大鼠MSC,体外培养和连续传代, 在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化;利用四唑盐比色(MTT)法测定MSC的生长曲线;流式细胞仪(FCM)鉴定MSC膜抗原.结果 原代分离的MSC在接种后48 h贴壁,细胞形态为椭圆形、多角形及短梭形,12天时细胞呈长梭形并达到90%单层融合.经传代扩增,细胞进一步纯化.细胞传代后2天内处于潜伏期, 3天后进入生长期,7天后进入平台期.FCM检测CD45、CD90阳性率分别为19.60%、95.38%.结论 贴壁培养法能有效分离纯化大鼠MSC,用此方法培养的细胞生长稳定,增殖能力活跃,具有MSC的一般生物学特性,为其成为组织工程理想的种子细胞提供了进一步的支持.
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全骨髓法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞及其生物学特性
建立一种体外纯化及培养扩增SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的简便有效方法.方法全骨髓法分离培养SD大鼠MSCs,通过体外培养和连续传代达到纯化和扩增MSCs目的.倒置显微镜下观察细胞形态变化情况;利用四唑盐比色(MTT)法测定MSCs的生长曲线;流式细胞仪(FCM)鉴定MSCs膜抗原.结果SD大鼠胫骨全骨髓细胞在分离后与含10％优质胎牛血清DMEM培养基混合,约5～10min后即可见大量有核细胞贴壁,细胞形态为圆形,24～48h后可见贴壁细胞转变为椭圆形、多角形及短梭形,7～12d时细胞呈长梭形并达到90％单层融合.通过传代细胞进一步纯化及扩增.细胞传代后2d内处于潜伏期,3d后进入生长期,5d后进入平台期.FCM检测第4代MSCs膜表面抗原CD45、CD90、CD29阳性率分别为1.50％、99.18％、97.70％.结论SD大鼠全骨髓贴壁法能有效得到分离纯化的MSCs,用此方法培养的SD大鼠MSCs生长稳定,增殖能力活跃,具有MSCs的一般生物学特性,可以为组织工程提供理想的种子细胞.为本实验研究打下基础.
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C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞分离培养方法的改良和鉴定
目的 建立一种体外纯化及培养扩增C57/BL6小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的简单有效方法.方法 利用骨髓MSCs在体外培养皿中培养时具有贴壁生长的特性,采用全骨髓法分离培养C57/BL6小鼠MSCs,通过体外培养和连续传代达到纯化和扩增MSCs目的,并与以优化.倒置显微镜下观察细胞形态变化情况；利用四唑盐比色(MTT)法测定MSCs的生长曲线；流式细胞仪(FCM)鉴定MSCs膜抗原.结果 C57/BL6小鼠胫骨全骨髓细胞在分离后与含15％优质胎牛血清DMEM/F12培养基混合,约5～10 min后即可见大量有核细胞贴壁,细胞形态为圆形,24～48 h后可见贴壁细胞转变为椭圆形、多角形及短梭形,7～12 d时细胞呈长梭形并达到90％单层融合.通过传代细胞进一步纯化及扩增.细胞传代后2d内处于潜伏期,3d后进入生长期,5d后进入平台期.第4代MSCs进行FCM检测CD45、CD44、CD29和CD54阳性率分别为2.4％、83.2％、95.1％和94.1％.激光免疫共聚焦结果显示造血细胞表面标物CD34和CD45阴性,而CD44和CD105阳性.结论 C57/BL6小鼠全骨髓贴壁法能有效得到分离纯化的MSCs,用此方法培养的C57/BL6小鼠MSCs生长稳定,增殖能力活跃,具有MSCs的一般生物学特性,可以为组织工程提供理想的种子细胞.
