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肠黏膜上皮细胞株文献资料
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应用RNA干扰技术检测ASCT2功能
目的 谷氨酰胺( glutamine,GLM)是肠道细胞的主要氧化燃料,必须通过载体的转运才能进入细胞内,其中载体ASCT2起重要作用,文中将应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术研究肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell,IEC)-6细胞膜GLN载体ASCT2的转运功能.方法 体外培养IEC-6,RNAi慢病毒颗粒进行细胞感染,3d后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达情况,5d后采用RT-PCR检测载体ASCT2的mRNA表达,7d后采用Western blot检测其蛋白表达,同时测定[3H]-L-GLN摄取率.结果 病毒转染细胞中均有GFP表达,载体ASCT2的mRNA表达下降60％,蛋白表达几近消失,[3H]-L-GLN摄取率下降15％.结论 通过慢病毒载体介导的RNAi这一方便有效的方法,证实了ASCT2载体在整个细胞的GLN转运中起15％以上的作用.
