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RNaseE文献资料
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绿脓杆菌RNA降解蛋白PNPase与RNase E表达纯化及相互作用
目的 RNA降解复合体是RNA在生物体内更新的主要工具.PNPase通过3'到5'核酸外切酶降解RNA,Rnase E参与其调控.通过对绿脓杆菌RNA降解蛋白PNPase与Rnase E进行克隆表达纯化,并获取复合物蛋白,进而揭示PNPase与Rnase E对绿脓杆菌RNA的降解机制.方法对PNPase与Rnase E基因序列进行PCR扩增,构建重组质粒,分别转入E.coli BL21中表达,应用镍离子亲和层析,离子亲和层析和分子筛纯化目的蛋白PNPase与Rnase E;通过Pull-down方法验证PNPase和Rnase E的相互作用.结果成功克隆、表达、纯化绿脓杆菌PNPase与Rnase E蛋白,并通过Pull-down获得大量PNPase-Rnase E复合物.结论PNPase与Rnase E蛋白能相互作用并形成PNPase-Rnase E复合物.
