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27-羟基胆甾醇诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡的调控机制
目的 探讨27-羟基胆甾醇(27-OHCH)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的调控机制.方法 不同浓度(0、3.125、6.25、12.5、25.0、50.0μM)的27-OHCH作用SH-SY5Y细胞,采用CCK-8法检测细胞存活率,在光学显微镜下观察27-OHCH处理组、添加苏氨酸蛋白激酶(AKT)抑制剂(LY294002)的27-OHCH处理组细胞形态变化,Western blot法检测磷酸化AKT (p-AKT)、cleaved-caspase-9蛋白表达,Annexin V-PE/7-AAD双染流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 给药24h,12.5、25.0、50.0μM 27-OHCH处理组SH-SY5Y细胞存活率均明显降低(均P＜0.05);给药48h,不同浓度(3.125～50.0μM)27-OHCH处理组SH-SY5Y细胞存活率均明显降低(均P＜0.05).在显微镜下观察发现,27-OHCH能诱导SH-SY5Y细胞凋亡,使细胞数量减少,而LY294002能减弱27-OHCH诱导的细胞毒效应.随着27-OHCH处理组浓度的增加,SH-SY5Y细胞内p-AKT (Ser 473)、cleaved-caspase-9(37/35kD)表达明显增强;经LY294002预作用后,不同浓度(0～50.0μM)27-OHCH处理组p-AKT(Ser 473)表达均受抑制,而12.5、25.0、50.0μM 27-OHCH处理组cleaved-caspase-9蛋白表达变化不明显.给药48h,12.5、25.0μM 27-OHCH处理组均能引起SH-SY5Y细胞凋亡效应,而LY294002预作用2h能逆转细胞凋亡效应(均P＜0.05).结论 27-OHCH可通过AKT信号通路诱导SH-SY5Y细胞凋亡.
