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TGF-β1诱导胃癌细胞上皮间质转化与CD133表达研究
目的：研究转化生长因子-β1（TGF-β1）促进胃癌侵袭能力，诱导胃癌MKN-45细胞发生上皮间质转化（EMT）的机制及其与PI3K/Akt信号通路调控肿瘤起始细胞标志物CD133表达的关系。方法设空白对照，应用TGF-β1处理MKN-45细胞(TGF-β1处理组)，观察其对细胞形态学的影响；Transwel 检测细胞侵袭能力的改变；RT- PCR及Western blot检测细胞EMT相关因子Snail、E- cadherin、N- cadherin、p- Akt及CD133的表达水平；PI3K特异性抑制剂LY294002预处理后再应用TGF-β1处理细胞（TGF-β1+LY294002处理组），检测p- Akt与CD133表达水平的变化；免疫磁珠分选CD133+与CD133-亚群细胞，检测CD133+组与CD133-组细胞EMT相关因子的表达差异。结果 TGF-β1处理72h后，TGF-β1处理组细胞由上皮形态转化为间质形态。TGF-β1处理组Snail、N- cadherin mRNA、蛋白表达水平均高于对照组（均P＜0.05）；而E- cadherin mRNA、蛋白表达水平均低于对照组（均P＜0.05）；Transwel 检测发现TGF-β1处理组穿膜细胞数高于对照组（P＜0.05）；TGF-β1处理组p- Akt蛋白与CD133 mRNA、蛋白表达水平均高于对照组（均P＜0.05）；TGF-β1+LY294002处理组p- Akt蛋白与CD133 mRNA、蛋白表达水平均低于TGF-β1处理组（均P＜0.05）。CD133+组Snail、N- cadherin mRNA、蛋白表达水平均高于CD133-组（均P＜0.05），而E- cadherin mRNA、蛋白表达水平均低于CD133-组（均P＜0.05）。结论 TGF-β1诱导胃癌细胞发生EMT，并通过PI3K/Akt信号通路调控CD133表达从而增强胃癌MKN-45细胞的侵袭能力。
