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重组腺相关病毒介导的BMP13和SOX9共转染促进骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化
目的 观察骨形态发生蛋白13(bone morphogenetic protein 13,BMP13)和性别决定区Y框蛋白9(sex determining region Y box protein 9,SOX9)基因共转染对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向类髓核细胞分化的影响.方法 通过腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)将目的基因导入BMSCs中;细胞分为4组:对照组、AAV-SOX9组、AAV-BMP13组和共转染组(AAV-SOX9+ AAV-BMP13);应用实时荧光定量PCR技术检测mRNA表达水平;Westem blot法检测蛋白表达水平;糖胺聚糖检测试剂盒检测糖胺聚糖的合成水平;MTT法检测细胞增殖.结果 共转染组BMP13和SOX9的表达水平明显高于AAV-SOX9组、AAV-BMP13组和对照组(P＜0.05);共转染组的糖胺聚糖合成水平、角蛋白19(keratin 19,KRT19)及蛋白聚糖(Aggrecan)和Ⅱ型胶原蛋白(typeⅡcollagen,Col2a1)的表达水平明显高于AAV-SOX9组、AAV-BMP13组和对照组(P＜0.05);另外,AAV-SOX9和AAV-BMP13及共转染组的细胞增殖活性明显高于对照组(P＜0.05),但AAV-SOX9组和AAV-BMP13组与共转染组的增殖活性相比差异无显著性(P＞0.05).结论 BMP13和SOX9双基因转染的BMSCs向类髓核细胞分化的能力明显高于单基因转染组,为椎间盘突出疾病的细胞治疗提供理论依据和参考.
关键词： 骨髓间充质干细胞 类髓核细胞 骨形态发生蛋白13 性别决定区Y框蛋白9 -
miR-101-3p靶向调控SOX9影响肝癌细胞增殖凋亡的研究
目的 探讨miR-101-3p对肝癌细胞增殖凋亡的影响及其对靶基因性别决定区Y框蛋白9(sex determining region Y-box 9, SOX9)的调控作用.方法 肝癌细胞转染miR-101-3p模拟物(miR-101-3p mimics组)、模拟物阴性对照(mimics control组)、SOX9小干扰RNA(SOX9 siRNA组)、siRNA对照(siRNA control组),同时以只加入转染试剂的细胞为对照组,RT-PCR检测细胞中miR-101-3p水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、SOX9表达,靶基因预测库预测miR-101-3p靶基因,荧光素酶报告基因鉴定靶基因.结果miR-101-3p mimics能够促进肝癌细胞中miR-101-3p表达,SOX9 siRNA能够抑制肝癌细胞中SOX9的表达.miR-101-3p mimics组细胞凋亡率高达(35.69 ± 5.27)%,细胞存活率只有(76.34 ± 4.63)%,细胞中Cleaved Caspase-3表达增多.靶基因预测库和双荧光素酶报告基因预测并鉴定miR-101-3p的靶基因是SOX9.miR-101-3p mimics能够抑制SOX9 mRNA和蛋白表达.SOX9 siRNA组细胞中SOX9蛋白表达下降,Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,细胞凋亡率高达(29.58 ± 2.58)%,而细胞存活率只有(69.47 ± 5.26)%.结论 miR-101-3p能够负调控靶基因SOX9,从而促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖.
关键词： 肝癌 凋亡 增殖 miR-101-3p 性别决定区Y框蛋白9
