首页 > 文献资料
-
表达HBsAg特异性siRNA的重组腺相关病毒载体的构建
目的 构建表达针对HBsAg小发卡RNA(shRNA)的重组腺相关病毒载体,以观察该病毒在体外对HBsAg和HBeAg的抑制作用.方法 将表达针对HBsAg的shRNA定向克隆到pAAV/U6-hrGFP质粒中,获得重组表达质粒(pAAV-shHBs-hrGFP);采用磷酸钙转染法将该质粒与包装质粒pAAV-RC和辅助质粒pHelper共同转染AAV 293细胞,进行rAAV-shHBs-hrGFP重组病毒包装.收获病毒感染HepG2.215细胞;采用ELISA法检测HBsAg和HBeAg水平.结果 酶切鉴定、测序结果表明,pAAV-shHBs-hrGFP载体成功构建.包装收获的rAAV-shHBs-hrGFP病毒液可以感染HepG2.215细胞,并且可以抑制HBsAg和HBeAg的表达.结论 制备的rAAV-shHBs-hrGFP病毒载体能够抑制HBV在体外的抗原表达.
关键词： HepG2.215细胞 腺相关病毒2 RNA干扰 HBsAg -
外周血单个核细胞与HepG2.215细胞共培养体系的研究
目的 建立外周血单个核细胞与HepG2.215细胞共培养体系,探讨不同培养基及效靶比对共培养体系的影响.方法 分离正常人外周血单个核细胞,加人植物血凝素(PHA),置于不同的培养基(DMEM,RPMI1640)中进行培养,采用不同效靶比((5:1、10:1、20:1、40:1)构建PBMCs与HepG2.215细胞共培养体系.用倒置显微镜观察细胞的形态及生长情况,台盼蓝拒染法检测PBMCs与HepG2.215细胞的细胞活力,cck-8法检测HepG2.215细胞的增殖活性.结果 DMEM培养基培养的HepG2.215细胞的细胞活力比RPM11640培养基培养的细胞高;而两种培养基培养的PBMCs的细胞活力无明显变化.共培养条件下,PBMCs对HepG2.215细胞增殖活性的抑制作用随效靶比的不同而有所差别,效靶比为20:1时抑制作用强.结论 在PBMCs与HepG2.215细胞共培养体系中,细胞培养基和效靶比对HepG2.215细胞的生长有影响.
关键词： 外周血单个核细胞 HepG2.215细胞 共培养
