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高效液相色谱法测定犬全血中两种基喜树碱活性成份
目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定犬全血中羟喜树碱两种活性成份羧酸型羟喜树碱(C-HCPT)和内酯型羟喜树碱(L-HCPT)含量的方法.方法:采用HPLC-荧光法,检测器激发波长为363 nm,发射波长为550 nb,Discovery C18色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-三乙胺-0.05 mol·L-1磷酸氢二钾缓冲液(34:5:1:60,pH:6.8),流速1.0ml·min-1,N2000色谱工作站采集数据,外标法计算药物浓度.结果:全血样品中C-HCPT、L-HCPT峰分离良好,内源性杂质不干扰样品峰,低检测浓度为2.5μg·L-1.C-HCPT、L-HCPT浓度范围在2.5~1500μg·L-1间呈线性相关,回归方程分别为γ=11196x-921.56和y=11840x-5188.4,相关系数分别为r=0.9998和0.9991,绝对回收率分别为85.5%~98.6%和78.4%~89.1%,相对回收率分别为100.7%~103.9%和96.8%~102.0%,日内和日间变异均小于15.0%,提取后样品-75℃冻存7 d稳定.结论:本实验方法具有专属性,且灵敏、可靠,适用于HCPT类制剂给药后血药浓度的检测,有助于深入研究HCPT两种活性成份C-HCPT和L-HCPT在体内的药代动力学特征.