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泛素特异性蛋白酶2a的原核表达纯化及酶活性分析
目的 为了探讨泛素特异性蛋白酶2a(USP2a)在肿瘤发生发展中的催化机制,构建USP2a C末端催化结构域原核表达质粒pET28a-USP2a-C,分析USP2a C末端催化结构域的活性情况.方法 利用荧光检测方法测定USP2a-C的酶促动力常数,并采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/ MS)分析USP2a的肽酶和异肽酶活性.结果 结果表明获得了可溶性表达的USP2a-C融合蛋白,酶促动力学分析 USP2a-C 水解底物 Ub-AMC 的催化效率 Kcat/Km =2. 53 × 105 mol/(L · s);LC-MS/MS分析结果表明USP2a-C能有效分解 Di-Ub和Ub-V77两种不同性质的底物,并且两者之间的催化活性差异无统计学意义.结论 获得了可溶性表达的 USP2a-C蛋白,并且分析证明其具有完整的去泛素化酶的活性.
关键词： 泛素特异性蛋白酶2 酶活性分析 液相色谱-质谱联用技术 -
泛素特异性蛋白酶2与肿瘤
泛素特异性蛋白酶2(ubiquitin specific protease 2,USP2)基因位于人类染色体11q23.3,转录在5’端不同的切割产生不同的亚型,翻译后产生不同长度的蛋白如USP2a、USP2b和USP2c.USP2是一种重要的去泛素化酶,通过特异性识别靶蛋白,使靶蛋白去泛素化并阻碍其降解,与细胞周期调控、生物钟调节等关系密切.与肿瘤有关的研究中,USP2蛋白的高表达或抑制导致其底物蛋白的含量变化,影响细胞的增殖、成瘤和浸润.在一些培养的细胞系中USP2高表达呈现癌基因特性,可以促进肿瘤的形成,但是在肿瘤坏死因子诱导的促凋亡效应的环节中需要USP2蛋白的参与.出现这些不一致的结果可能与肿瘤中存在不同的同型USP分子和其底物偶联的不同泛素链有关,需要进一步研究.
