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ASIC1文献资料
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大鼠ASIC1基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及其功能鉴定
目的：构建大鼠酸敏感离子通道1(ASIC1)基因启动子荧光素酶报告质粒pGL3-ASIC1-promoter,并进行功能的鉴定。方法设计、合成ASIC1启动子引物,采用聚合酶链反应( PCR)技术从大鼠全基因组DNA中扩增出ASIC1启动子片段；Nhe I和Xho I双酶切后将目的片段连接到pGL3-Basic报告载体上；构建的pGL3-ASIC1-promoter重组质粒和pRL-TK内参质粒瞬时共转染293T细胞检测ASIC1启动子活性。结果 PCR扩增得到大鼠ASIC1基因启动子片段；成功构建pGL3-ASIC1-promoter报告基因载体,菌落 PCR和测序结果表明启动子DNA序列正确。与空质粒pGL3-Basic转染组相比,pGL3-ASIC1-promoter质粒转染组的荧光素酶活性明显增加(P<0．01)。结论成功构建了大鼠ASIC1基因启动子报告基因载体,为探究ASIC1转录表达的调控机制奠定基础。
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ASIC1基因敲除小鼠的繁殖及基因鉴定
饲养并繁殖酸敏感离子通道1(ASIC1)基因敲除杂合子小鼠,提取小鼠尾部组织DNA,采用聚合酶链反应( PCR)方法鉴定子代小鼠基因型. ASIC1 基因敲除小鼠的繁育和鉴定均获得成功,子代小鼠基因型分别为杂合子( ASIC1+/-)、纯合子( ASIC1-/ -)和野生型( ASIC1+/ +).
