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超滤法提纯头孢菌素C的应用研究
目的研究既能提高滤液质量和过滤收率,又能简化操作工艺流程的提纯头孢菌素C发酵液的方法,并对超滤过程中顶洗加水量进行探讨。方法采用Ultra flo超滤系统提纯未经任何预处理的头孢菌素C发酵液。结果滤液中蛋白质含量仅为原工艺的1/10,过滤收率由原工艺的78%提高到83.8%。系统平均膜通量可达66.3 LMH,且可长时间连续平稳运行,被污染的膜经清洗后与新膜没有明显的差异。理论加水量倍数为投料液的1.8倍,实际的平均加水量倍数为1.70倍。结论 Ultra flo超滤系统完全能代替原工艺提纯不经预处理的头孢菌素C发酵液,理论加水量计算方法可以用于实际洗涤操作。
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热休克蛋白10和热休克蛋白60的表达、纯化及与线粒体DNA转录因子A相互结合
目的:表达、纯化热休克蛋白10(Hsp10)和热休克蛋白60(Hsp60),研究人类线粒体DNA转录因子A(TFAM)在体外与Hsp10,Hsp60间的相互交联作用.方法:使用Escherichia.Coli(E.coli)诱导表达含有6个组氨酸标记的Hsp10和Hsp60,镍离子鳌合树脂分离纯化后,体外分别与纯化TFAM共育,抗-TFAM抗体免疫沉淀,SDSPAGE分离蛋白,CBB探测分析.结果:Hsp10可在体外与TFAM发生免疫共沉淀,Hsp60不能.结论:Hsp10可能为TFAM-复合体组分.
关键词： 热休克蛋白10 热休克蛋白60 分离与提纯 线粒体DNA转录因子A -
食管癌细胞株热休克蛋白70肽复合物的提纯及抗肿瘤活性观察
目的:利用抗体亲和层析法从食管癌细胞内提纯热休克蛋白70肽复合物(heat shock protein70 peptidecomplexes,HSP70-PCs),观察其诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对食管癌细胞的杀伤作用.方法:常规方法造成EC-109细胞热休克,偶联HSP70抗体的CNBr-Sepharose 4B亲和层析柱分离纯化蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot检测获得的蛋白;混合淋巴细胞反应检测纯化过程中收集的蛋白粗提液、PBS洗脱蛋白及解吸附剂洗脱蛋白对食管癌细胞的杀伤活性.结果:细胞经热休克作用,裂解后获蛋白粗提液,经亲和层析柱过柱、洗脱后得到的蛋白经电泳鉴定为相对分子质量在70 000左右的单一条带,且经Western blot鉴定可与HSP70单克隆抗体结合,证实为HSP70;MTT法检测解吸附剂洗脱蛋白诱导的CTL对食管癌细胞的杀伤率为(38.10±2.78)%,明显高于蛋白粗提液(22.22±2.54)%和PBS洗脱蛋白(17.46±3.89)%,P均＜0.05.结论:利用抗体亲和层析法,能够简便地从热休克处理过的食管癌细胞株中分离纯化HSP70-PCs,且所获得的HSP70-PCs具有较强的激活CTL杀伤食管癌细胞的生物学活性.
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大孔树脂在中药成份分离中的应用进展
大孔树脂是20世纪70年代末发展起来的一类有较好吸附性能的有机高聚物吸附剂,它是一种不溶于酸、碱及各种有机溶剂(如乙醇、丙酮及烃类等),对氧、热、化学试剂稳定及机械强度高的有机高分子聚合物,具有良好的吸附性能.现已广泛用于物质的分离纯化.
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僵蚕抗凝活性成分的研究
介绍用NaOH水解,再经乙醇分级分离的方法,从僵蚕提取液中获得抗凝血酶活性物质(成分).该活性不被AT-Ⅲ抗体中和,表明其具有不依赖AT-Ⅲ的作用.活性物均在218 nm左右有强吸收峰.其活性成分不属糖、蛋白质和生物碱类,而可能与水蛭一样系一种肽类或其它含氨基化合物.
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超声波对提取魔芋葡甘露聚糖的影响
目的:探索超声波对提取魔芋精粉中葡甘露聚糖(Konjac Glucomannan, KGM)提取率的影响. 方法: 魔芋精粉水溶胀后,用探头式超声发生器进行处理,用分光光度法测定KGM水解液中的糖含量. 结果: 固定超声波频率20 kHz,超声功率80 W,作用时间7 min时为佳的操作条件,超声法比常规法提取液中KGM含量明显提高(P<0.01),提高率为10.81%. 结论: 超声水提法的提取液中KGM含量明显高于常规水提法.
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石香薷挥发油抗流感病毒活性成分的初步研究
①目的确定石香薷挥发油(MCMVO) 体内外抗流感A3型病毒活性成分.②方法硅胶柱层析法分离各组成成分,用CPE抑制实验对抗病毒活性成分进行初步追踪研究,用小白鼠流感病毒性肺炎模型作进一步评估.③结果 MCMVO,中性MCMVO和硅胶柱层析分离后洗脱液(C部分)均具有抗流感A3型病毒作用,以洗脱液C部分抗病毒活性高,抗病毒治疗指数分别为35.0,36.9和70.9,MCMVO和洗脱液C部分给药剂量在100 mg/kg体质量及其以上对小鼠流感病毒性肺炎有明显的治疗作用.④结论抗流感病毒活性成分可能存在于MCMVO经硅胶柱层析后洗脱液C部分.
