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靶向纳米材料作为大鼠单个核细胞基因载体的研究
目的:探讨纳米材料聚乙二醇-聚乙烯亚胺(PEG-PEI)作为基因载体的可行性研究,研究其负载质粒DNA(pDNA)的能力,分析所形成纳米材料/pDNA复合物的特性,以及体外对细胞的毒性大小及其转染效率.方法:以PEI为对照,合成PEG-PEI,采用MTT法检测所形成纳米材料/DNA复合物对大鼠单个核细胞(PBMC)的细胞毒性,再采用倒置荧光显微镜及流式细胞仪检测转染效果.结果:N/P＜ 10时,PEG-PEI和PEI的存活率分别为82.7％及81.3％(P＞0.05);N/P=10时,PEG-PEI是81％,PEI为59％ (P ＜0.05);N/P＞10时,PEG-PEI的细胞存活率比PEI低(P＜0.05).N/P=10时,用倒置荧光显微镜观测PEG-PEI较PEI表达的绿色荧光多,荧光强度大(P＜0.05);同时利用流式细胞仪检测PEG-PEI和PEI的转染效率,分别为28.9％和12.5％ (P ＜0.05).结论:纳米材料PEG-PEI具有强的负载能力,转染效率高,细胞毒性低的优点,为作为多发性硬化基因载体的可行性奠定了实践基础.
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新型靶向纳米材料介导基因治疗胶质瘤的体外研究
目的:合成可降解性叶酸(FA)-PEG-PEI和PEG-PEI并研究其负载质粒DNA的能力,比较所形成纳米材料/DNA复合物在体外对细胞的毒性大小及其转染效率,为进一步体内基因治疗做好准备.方法:化学方法合成可降解性FA-PEG-PEI和PEG-PEI,检测所形成纳米材料/DNA复合物的粒径、zeta-电位和凝胶阻滞能力,以及对C6(叶酸受体中度表达)、293T(叶酸高度表达)和HepG2(叶酸不表达)3种细胞的细胞毒性,并对3种细胞进行转染,分别用流式细胞仪、荧光素酶基因表达水平和倒置荧光显微镜检测转染效果.结果:FA-PEG-PEl与PEG-PEI复合pDNA后进行电位、粒度分析表明其带正电,粒径在200～300nm,FA-PEG-PEI和DNA的完全结合在N/P比为5,PEI和PEG-PEI与DNA的完全结合则出现在N/P比为10.M1TT怯证实了复合物在c6、293T、HepG23种细胞中的细胞毒性表明其细胞毒性比常用的PEI 25ku低;在3种细胞中,转染效率从整体来看,N/PtL=15时,FA-PEG-PEI萤光素酶基因表达水平高;类似的,通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜更直观的检测了转染效果,表明FA-PEG-PEI对C6、293T细胞都有靶向效果且在N/P比为15时靶向效果好,而在HepG2细胞中没有靶向效果.结论:此研究结果为叶酸靶向基因治疗神经胶质瘤寻找行之有效的基凶载体提供了理论和实践基础,可进一步于动物体内进行联合基因治疗神经胶质瘤.
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新型靶向纳米材料作为基因载体的评估
目的 合成可降解性多聚赖氨酸-聚乙烯亚胺-聚乙二醇(PLL-PEG-PEI)并研究其负载质粒DNA (pDNA)的能力,比较所形成纳米材料/DNA复合物在体外对细胞的毒性大小及其转染效率,为进一步体内基因治疗做好准备.方法 以PEI 25 kD为对照,并化学方法合成可降解性PLL-PEG-PEI,检测所形成纳米材料/DNA复合物对PBMC的细胞毒性,并对细胞进行转染,分别用流式细胞仪、荧光素酶基因表达水平和倒置荧光显微镜检测转染效果.结果 PLL-PEG-PEI复合pDNA后,采用MTT法检测出复合物在PBMC细胞中的细胞毒性,并证实PLL-PEG-PEI细胞毒性比常用的PEI 25ku低,在PBMC细胞中,转染效率从整体来看,N/P比=15时,PLL-PEG-PEI萤光素酶基因表达水平高,类似的,通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜更直观的检测了转染效果,表明PLL-PEG-PEI对PBMC细胞有靶向效果且在N/P比为15时靶向效果好.结论 此研究结果为多聚赖氨酸靶向基因治疗神经系统自身免疫性疾病寻找行之有效的基因载体提供了理论和实践基础,可进一步于动物体内进行联合基因治疗中枢神经免疫疾病.
关键词： 纳米材料 PLL-PEG-PEI 体外基因转染
