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类高血糖素多肽-2对大鼠梗阻性黄疸小肠上皮细胞紧密连接的调控
目的:探讨类高血糖素多肽-2(glucagon-like peptide-2,GLP-2)对梗阻性黄疸小肠上皮细胞紧密连接的调控机制.方法:建立梗阻性黄疸大鼠模型,于造模后10 d,将大鼠随机分为对照组和实验A、B组,另设正常进食大鼠作为正常组,每组10只.对照组给予0.01 mmol/L的PBS 0.5 mL,A组给予250g/(kg·d)、实验B组给予125 g/(kg·d)的GLP-2溶液0.5 mL皮下注射,2次/d,连续7 d后处死.取末端回肠黏膜组织,采用免疫组织化学及Western blots检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1和Claudin-4的分布和表达,并利用图像分析系统对Western blots图像进行定量分析.结果:梗阻性黄疸时ZO-1和Occludin分布不均,染色变淡,线条模糊,边缘粗糙有毛刺状突起.补充外源性GLP-2后,A组的ZO-1、Occludin和Claudin-1染色有所恢复,且强阳性表达例数分别由对照组的2、3、2例升至A组的8、9、8例,差异有统计学意义(P均<0.05);Claudin-4表达和分布变化不明显.而B组对紧密连接蛋白没有影响.Western blot图像定量分析得到相同的结果.结论:梗阻性黄疸时补充外源性GLP-2,能够影响小肠黏膜上皮紧密连接蛋白的分布和表达,可以恢复肠黏膜上皮屏障的完整性.
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GLP-2对实验性梗阻性黄疸小肠上皮细胞MLCK表达的影响
目的 探讨类高血糖素多肽-2(GLP-2)对大鼠实验性梗阻性黄疸小肠上皮细胞肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的影响.方法 建立梗阻性黄疸大鼠模型,10 d后对照组给予0.01 mmol/L PBS 0.5 mL,实验甲组给予250 g/(ks·d),实验乙组给予125 g/(kg·d)的GLP-2溶液0.5 mL,分别皮下注射,均为每天2次,连续7 d后处死.并设假手术组.检测末端回肠黏膜形态学变化;采用免疫组化和Western blots法检测MLCK的分布和表达,并利用图像分析系统对Western blots图像结果进行定量分析.结果梗阻性黄疸时小肠黏膜萎缩明显,肠绒毛短而稀疏.外源性补充GLP-2后小肠绒毛上皮结构有所恢复;实验甲组平均肠绒毛高度、黏膜厚度和隐窝深度与对照组相比分别上升27.1%,26.4%和25.3%(均P<0.01).梗阻性黄疸时对照组MLCK染色稀疏,分布不均.实验甲组的MLCK染色有所恢复,强阳性表达例数(8/10)较对照组(2/10)明显升高(P<0.05),实验乙组(4/10)没有变化(P>0.05).Western blot图像定量分析所得结果相同.实验甲组的绒毛高度的下降值与MLCK图像的吸光度的下降值呈正相关(r=0.62,P<0.01).结论 梗阻性黄疸时小肠黏膜明显萎缩,外源性补充GLP-2能增强小肠黏膜上皮MLCK的分布和表达,恢复肠黏膜上皮的形态.
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GLP-2对实验性梗阻性黄疸小肠上皮细胞紧密连接的调控
目的 探讨类高血糖素多肽-2(GLP-2)对实验性梗阻性黄疸小肠上皮细胞紧密连接的调控.方法 建立梗阻性黄疸大鼠模型,造模后10d随机分组,每组10只.黄疸组皮下注射0.01 mmol/LPBS 0.5 mL,实验甲组腹腔注射250 g/(kg*d),实验乙组腹腔注射125g/(kg*d)的GLP-2溶液0.5 mL,每天2次,连续7 d后处死.另设正常对照组,用免疫组化及Western blots检测末端回肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1,Occludin及Claudin-1, Claudin-4的分布和表达,并用图像分析系统对Western blots图像进行定量分析.结果 正常情况下ZO-1,Occludin和Claudin-1染色强阳性率分别为70.0%,80.0%和70.0%.梗阻性黄疸时ZO-1和Occludin分布不均,染色变淡,线条模糊.补充外源性GLP-2后,实验甲组的ZO-1,Occludin和Claudin-1染色有所恢复,且强阳性表达率分别从黄疸组的20.0%,30.0%和20.0%升至实验甲组的80.0%,90.0%和80.0% (均P<0.05);Claudin-4表达和分布变化不明显.实验乙组对紧密连接蛋白无影响.Western blots图像定量分析得到相同的结果. 结论 梗阻性黄疸时,补充GLP-2可影响小肠黏膜上皮紧密连接蛋白的分布和表达;提示GLP-2能恢复和维持小肠黏膜上皮屏障的完整性.
