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过表达慢病毒文献资料
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GJB6基因突变体过表达慢病毒载体的构建及其在HaCaT细胞中的表达
目的:明确GJB6目的基因蛋白Cx30在GJB6 3种突变体A88V、G11R和V37E在HaCaT细胞中的表达.方法:构建GJB6基因突变体的慢病毒载体,并转染至HaCaT,应用荧光倒置显微镜检测其表达.结果:突变体中G11R和A88V经过多次转染实验,能够明确观察到HaCaT细胞细胞膜上有Cx30蛋白的荧光表达;而V37E突变型荧光表达极弱或无.结论:3种突变体的Cx30表达量不同,初步推测突变体编码的蛋白质或不能定位于角质形成细胞膜或不能形成功能性的Cx30,从而影响了HaCaT细胞正常的增殖和分化.
关键词： CX30 GJB6基因及其突变体 过表达慢病毒 HaCaT细胞 -
锌指蛋白146(RNF146)对吡柔比星引起的小鼠睾丸精原细胞DNA损伤的保护作用
目的 评价锌指蛋白146(RNF146)对化疗药吡柔比星引起的GC-1小鼠睾丸精原细胞DNA损伤的保护作用.方法 采用1.0μg/mL吡柔比星处理的方法复制DNA损伤的小鼠GC-1精原细胞模型.构建小鼠rnf146慢病毒过表达载体pCDH-rnf146并包装rnf146过表达慢病毒,感染GC-1细胞上调rnf146的表达,Western blot验证过表达效率.评价RNF146对吡柔比星引起的GC-1细胞增殖抑制、凋亡增多及DNA损伤的保护作用.结果 成功构建了pCDH-rnf146重组质粒并包装具有良好感染效率的RNF146过表达慢病毒.溴脱氧尿苷(BrdU)掺入标记显示RNF146能够减轻吡柔比星引起的GC-1增殖抑制.原位末端转移酶标记技术(TUNEL)提示RNF146能够抑制吡柔比星诱导的GC-1细胞凋亡.彗星实验显示RNF146过表达能够有效保护吡柔比星作用下GC-1细胞DNA的完整性.结论 RNF146对化疗药吡柔比星引起的小鼠睾丸精原细胞损伤具有保护作用.
