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目的载体pLV.Des3d.P/neo文献资料
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人RASSF1A基因慢病毒表达载体的构建及鉴定
目的 应用pLV.Des3d.P/neo 构建人RASSF1A 基因的慢病毒表达载体并对其进行鉴定.方法 采用Oligo核酸软件对Genbank上所发表的RASSF1A序列进行分析,设计一对RASSF1A 基因上下游引物,利用Gateway克隆方法,分别在其两端添加attB重组位点,运用PCR扩增RASSF1A 和IRES/eGFP,将PCR 产物进行BP 反应然后转化到Stbl3感受态菌,通过卡那霉素抗性筛选、PCR 鉴定,选取鉴定正确的pDown-RASSF1A 和pTail- IRES/eGFP 克隆测序.将pDown-RASSF1A和pTail-IRES/eGFP与pLV.EX3d.P/neo混合进行LR 反应,构建慢病毒载体pLV.EX3d.P/neo-EF1A＞RASSF1A＞IRES/eGFP,再次进行PCR、测序鉴定.结果 成功地构建了hRASSF1A基因的重组慢病毒表达载体pLV.EX3d.P/neo-EF1A＞RASSF1A＞IRES/eGFP.结论 基因序列克隆正确,为进一步探讨RASSF1A在肿瘤基因治疗中的作用奠定了基础.
关键词： RASSF1A基因 人 目的载体pLV.Des3d.P/neo 慢病毒
