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靶向抑制有丝分裂驱动蛋白治疗多西紫杉醇耐药前列腺癌的体外疗效
目的 探讨甲氧基-(S)-三苯甲基-L-半胱氨酸[S(MeO)TLC]靶向抑制有丝分裂驱动蛋白(KSP)在体外试验中对多西紫杉醇耐药前列腺癌的治疗效果.方法 培养建立多西紫杉醇耐药前列腺癌细胞株(PC3R),Western blotting检测不同细胞株(PC3、DU145及PC3 R) KSP蛋白表达水平;实验分空白对照组、PC3R组及PC3组,MTT及台盼兰染色细胞活性实验观察S(MeO)TLC抑制耐药细胞增殖效果;以耐药细胞株PC3R为研究对象,实验分为S(MeO)TLC组及对照组,Heochst染色、流式细胞仪及RT-PCR技术检测S(MeO) TLC诱导耐药细胞凋亡的效果.结果 PC3、DU145、PC3R细胞KSP蛋白表达量差异无统计学意义(P＞0.05).PC3R细胞S(MeO) TLC半数抑制浓度(IC50)为120 nmol/L,与PC3细胞(IC50:106 nmol/L)比较,差异无统计学意义(P＞0.05).PC3R细胞给予S(MeO)TLC作用24h后,87.9％细胞停滞在有丝分裂期;给药72 h后,有丝分裂期停滞细胞显著凋亡.与对照组相比,S(MeO)TLC组PC3R细胞Caspase-3(t=13.445,P=0.0002)、Caspase-8(t=9.494,P=0.0007)、Caspase-9(t=5.198,P=0.007)、PARP(t=19.097,P=0.00004)及自噬标志指标LC3(t=22.609,P=0.00002)和Beclin1(t=61.266,P=0.0000004)的mRNA量均明显升高.结论 前列腺癌多西紫杉醇耐药与KSP蛋白表达无关,KSP蛋白靶向抑制剂S(MeO) TLC能够有效抑制多西紫杉醇耐药前列腺癌细胞增殖并诱导其凋亡.在此过程中,内源性和外源性Caspase依赖性的凋亡途径均发挥了重要作用,且自噬可能发挥协同作用.
