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小鼠OX40真核表达载体的构建及表达
目的构建小鼠OX40的真核表达载体.方法从ConA活化的小鼠脾淋巴细胞中提取总RNA,应用RT-PCR方法,扩增获得编码小鼠OX40分子的cDNA,并将其克隆到PUCm-T载体,经PCR、酶切和测序分析证实,进而脂质体法转染HUVECS,G418筛选,RT-PCR法鉴定获得表达OX40分子的阳性细胞株.结果构建的pIRES2-EGFP-OX40重组真核表达载体经PCR、酶切和测序分析,证实该片段与GeneBank记载的小鼠OX40cDNA序列完全一致.筛选获得能表达小鼠OX40蛋白的HUVECs转基因细胞.结论成功构建小鼠OX40转基因细胞,该克隆细胞为进一步研究OX40分子的功能奠定了基础.
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小鼠OX40稳定表达细胞株的构建及其对B细胞促分化作用的研究
目的: 构建稳定表达小鼠OX40的细胞株HUVEC,并探讨其对B细胞的促增殖作用. 方法: 从ConA活化的小鼠胸腺淋巴细胞中提取总RNA, 应用RT-PCR法扩增小鼠OX40的cDNA, 并将其克隆到pUCm-T载体中,经PCR、酶切和测序分析,进而构建pIRES2-EGFP-OX40重组真核表达载体.以脂质体法转染HUVEC,经G418筛选后,用流式细胞术检测OX40分子的表达.采用 3H-TdR掺入法,研究OX40信号对体外培养的B细胞的促分化作用.结果: 构建了OX40基因的真核表达载体.经PCR、酶切和测序证实, 插入的目的片段与GenBank登录的小鼠OX40 cDNA序列完全一致.用G418筛选后,获得能稳定表达小鼠OX40蛋白的HUVEC细胞.3H-TdR掺入法结果显示,小鼠OX40稳定表达的细胞HUVEC对体外培养的B细胞具有促增殖、分化的作用.OX40/OX40L信号与CD40/CD40L信号具有协同作用.结论: 成功地构建小鼠OX40稳定表达地细胞,OX40对B细胞具有促增殖、分化作用.
