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溶血磷脂酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力影响的机制探讨
目的 探讨溶血磷脂酸(LPA)对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力影响的机制.方法 ①将体外培养的MDA-MB-231细胞分为转染组、对照序列组和空白组.转染组转染(YAP)siRNA 3 h后加入浓度50 μmol/L的LPA继续培养16 h.对照序列组转染对照序列 3 h后加入浓度50 μmol/L的LPA继续培养16 h.空白组不转染、不加LPA,常规培养16 h.用Transwell小室行细胞迁移实验和细胞侵袭实验观察各组细胞迁移、侵袭能力.②用50 μmol/L的LPA培养MDA-MB-231细胞0、10、30、60、120、240、480 min,收集细胞,用Western blotting法检测磷酸化YAP(p-YAP)相对表达量.用0、1、10、20、50 μmol/L的LPA培养MDA-MB-231细胞120 min,收集细胞,用Western blotting法检测磷酸化YAP相对表达量.③将体外培养的MDA-MB-231细胞分为1、2、3、4、5、6、7组,分别加入培养基、MAPK通路阻断剂SB203580、PI3K通路阻断剂LY294002、Akt通路阻断剂MK2206、 MEK通路阻断剂PD98059、Rho抑制剂(C3转移酶)和ROCK抑制剂(Y27632),然后加入50 μmol/L的LPA继续培养120 min.采Western blotting法检测pYAP表达.结果 ①转染组、对照序列组、空白组细胞迁移实验穿膜细胞数分别为(10.01±2.05)、(12.13±2.44)、(7.06±2.54)个,细胞侵袭实验穿膜细胞数分别为(9.24±2.18)、(11.54±2.09)、(6.75±1.48)个.对照序列组细胞迁移实验、细胞侵袭实验穿膜细胞数均高于空白组(P均<0.05).转染组细胞迁移实验、细胞侵袭实验穿膜细胞数均低于对照序列组细(P均<0.05).②用10 μmol/L的LPA培养MDA-MB-231细胞0、10、30、60、120、240、480 min,MDA-MB-231细胞YAP相对表达量分别为0.11±0.023、0.08±0.002、0.05±0.027、0.04±0.012、0.01±0.002、0.03±0.004及0.05±0.007.培养时间为120 min时MDA-MB-231细胞pYAP相对表达量低(P均<0.05).用0、1、10、20、50 μmol/L的LPA培养MDA-MB-231细胞120 min后pYAP相对表达量分别为0.23±0.024、0.18±0.020、0.09±0.022、0.06±0.017、0.02±0.012.随着LPA浓度的升高,MDA-MB-231细胞pYAP相对表达量逐渐降低(P均<0.05).③1、2、3、4、5、6、7组MDA-MB-231细胞pYAP相对表达量分别为0.34±0.027、0.32±0.022、0.35±0.019、0.33±0.021、0.34±0.025、0.74±0.029及0.65±0.022.1、2、3、4、5组MDA-MB-231细胞pYAP相对表达量相比,P均>0.05.6组MDA-MB-231细胞pYAP相对表达量高于1~5组(P均<0.05).7组MDA-MB-231细胞YAP相对表达量高于1~5组(P均<0.05),但低于6组(P<0.05).结论 LPA通过Rho和ROCK通路导致乳腺癌MDA-MB-231细胞YAP去磷酸化,进而促进乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭.
