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人骨肉瘤U-2 OS细胞对甲氨蝶呤体外耐药机制的初步研究
目的 探讨人骨肉瘤细胞(U-2 OS)对甲氨蝶呤(MTX)耐药的机制.方法 采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,对U-2 OS细胞进行诱导培养,建立4株耐药细胞株U-2 OS/R1～U-2 OS/R4.MTT法检测并比较各细胞亚系对MTX的敏感性,半定量RT-PCR法检测各亚系还原性叶酸载体(RFC)、二氢叶酸还原酶(DHFR)mRNA表达.结果 本实验成功建立了4株MTX耐药细胞亚系,即U-2 OS/R1～U-2 OS/R4;MTT法显示各亚系耐药性逐渐增加,MTX耐药与RFC mRNA表达降低及DHFR mRNA表达增加相关(P<0.05).结论 RFC、DHFR mRNA参与了U-2 OS细胞的MTX耐药;测定RFC、DHFR基因状态有助于筛选MTX耐药的骨肉瘤患者.
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MTHFR C677T和RFC1 G80A基因多态性对急性淋巴细胞白血病患儿大剂量甲氨蝶呤化疗不良反应的影响
目的 探讨MTHFR C677T和RFC1 G80A基因多态性是否对儿童ALL大剂量甲氨蝶呤(HD-MTX)化疗后不良反应有影响.方法 回顾性分析53例ALL患儿(2～12岁)HD-MTX化疗后的不良反应,并检测患儿MTHFR C677T和RFC1 GSOA基因型,探讨不良反应与基因型的相关性.采用PCR-限制性内切酶片段长度多态性技术(PCR-RFLP)扩增基因片段并酶切电泳观察分析MTHFR C677T和RFC1 G80A的多态性.患儿HD-MTX化疗后发生的不良反应按照WHO标准统一评价,采用免疫偏振荧光法(FPIA)检测HD-MTX化疗44 h后MTX血清药物水平.结果 53例ALL患儿中,MTHFR 677CC、677CT和677TT基因型分别占28.3%、43.4%和28.3%;RFC1 80GG、80GA和80AA基因型分别占13.2%、58.5%和28.3%.接受HD-MTX化疗的53例ALL患儿中,总体不良反应发生率为62.3%(33/53例),而RFCI 80AA基因型患儿发生不良反应的可能性是RFC1 80GG基因型患儿的10倍(OR=10.00,95%CI:1.26～79.34,P=0.03).在有不良反应的患儿中,RFC1 80A等位基因携带频率(70.5%)显著高于RFC180G(51.1%,P=0.04),携带RFC1 80A等位基因可增加HD-MTX化疗后不良反应的发生风险(OR=2.29,95%CI:1.02～5.10).与其他基因型患儿比较,RFC1 80AA基冈型者发生Ⅱ度以上肝损伤的风险加大(OR=5.6,95%CI:1.536～20.420,P=0.006),并且发生排泄延迟的概率也较其他基因型者高(OR=5.061,95%CI:1.373～18.654,P=0.028).结论 RFC1 G80A基因多态性有望成为对ALL患儿HD-MTX毒性反应进行预测的有效指标之一.
