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反转录-环介导等温扩增技术文献资料
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H7N9人禽流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立
目的 采用RT-LAMP技术建立一种针对H7N9人禽流感病毒的特异、灵敏、快速、可视、简便的检测方法.方法 根据H7N9人禽流感病毒HA基因的保守序列,利用PrimerExplorer V4软件,设计一套针对HA基因的7个区域的5条特异性引物,优化反应体系与扩增条件,并验证其特异度与灵敏度.结果 该方法能检测出H7N9亚型流感病毒,而对H1亚型、H3亚型、H5亚型、H6亚型、H9亚型流感病毒、乙型流感病毒、人副流感病毒、呼吸道合胞病毒、人冠状病毒、人偏肺病毒、人腺病毒、人博卡病毒均无扩增反应,其低检出限为0.01 pg.另外,扩增反应只需要45 min即可判读结果,并可通过反应液是否有沉淀或向反应液中加入荧光染料来对结果进行可视化诊断.结论 本研究建立的RT-LAMP检测方法具有高特异度、高灵敏度、快速简便、可视化判读结果等优势,适合在基层进行H7N9人禽流感病毒的快速检测,并可以应用于大流感疫情的准确筛查.
关键词： H7N9 人禽流感病毒 反转录-环介导等温扩增技术 基层检测
