您当前的位置：
首页 > 文献资料
所属专业：
实时荧光-步RT-PCR文献资料
-
实时荧光RT-PCR与普通RT-PCR检测噬菌体MS2的差异
目的:通过比较实时荧光-步RT-PCR和普通的两步法RT-PCR在检测噬菌体MS2时灵敏度和特异性的差异,以期在消毒学、微生物等相关试验中选择灵敏度和特异性能满足所需的-种方法检测噬菌体或类似病毒.方法:采用实时荧光-步RT-PCR法和普通的两步法RT-PCR对噬菌体MS2复制酶基因和衣壳蛋白基因进行检测,比较两种方法对两个基因片段的检测灵敏度和特异性.结果:对于复制酶基因,实时荧光RT-PCR的灵敏度达0.25 pg/山,普通的两步法RT-PCR为2500 pg/μl;而对于衣壳蛋白基因,前者灵敏度达0.025 pg/μl,后者为250 pg/μl.在所用的10种菌(毒)株的特异性检测中,实时荧光-步RT-PCR法只检测到噬菌体f2和大肠杆菌ATCCl5597(MS2的宿主菌)有与噬菌体MS2复制酶基因和衣壳蛋白基因均相应的两种荧光信号,而其它菌(毒)株为阴性结果;两步法RT-PCR电泳图谱只显示出噬菌体f2有-条与噬菌体MS2衣壳蛋白基因相当的条带以及大肠杆菌ATCCl5597有-条与MS2复制酶基因大小相当的条带,其它菌(毒)株的电泳图谱无相关条带.结论:对于噬菌体MS2的检测,实时荧光-步RT-PCR法的灵敏度比普通的两步法RT-PCR高104倍,但特异性后者略强于前者.
关键词： 实时荧光-步RT-PCR 两步法RT-PCR 噬菌体MS2 灵敏度 特异性
