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表面抗原启动子-Ⅰ文献资料
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精氨琥珀酸裂解酶上调乙型肝炎病毒表面抗原启动子Ⅰ的研究
目的了解精氨琥珀酸裂解酶(ASL)与乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原启动子-Ⅰ(Sp Ⅰ)的关系,研究精氨琥珀酸裂解酶与SPⅠ在HBV致病的分子生物学机制中的作用.方法应用聚合酶链反应(PCR)扩增精氨琥珀酸裂解酶编码基因.以T-A克隆法,将ASL基因片段连人载体pGEM-T.将获得的质粒pGEM-T-ASL,与报告质粒pcDNA3.1(-)分别用KpnI和XhoI双酶切后构建ASL表达载体pcDNA3.1(-)-ASL,将重组表达载体pcDNA3.1(-)-ASL和pCAT3-Sp Ⅰ瞬时转染HepG2细胞,同时转染pCAT3-basic入HepG2细胞,作为阴性对照,48h后收获细胞.用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞中报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性,以了解ASL对Sp Ⅰ转录活性的调节作用.结果构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)-ASL经过酶切鉴定和测序证实正确.在真核表达载体pcDNA3.1(-)-ASL和pCAT3-Sp Ⅰ共转染的HepG2细胞中,CAT表达活性是CAT3空载体的3.3倍,是pCAT3-SpⅠ的1.45倍.结论精氨琥珀酸裂解酶可以上调SpⅠ启动子的活性,促进表面抗原基因的表达.
