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人肝再生增强因子下调钙结合蛋白S100A11基因表达的研究
目的探讨人肝再生增强因子(ALR)对钙结合蛋白S100A11启动子(S100A11p)转录的调节作用.方法利用生物信息学技术确定S100A11p区域,聚合酶链反应(PCR)扩增S100A11p,克隆至真核报告载体pCAT3中,构建pCAT3-S100A11p报告载体;以该质粒转染HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测报告基因编码产物氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性,并以人ALR的真核表达载体pcDNA3.1(-)-ALR共转染的HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测CAT的表达活性.结果pCAT3-S100A11p在HepG2细胞中具有CAT的表达活性;以pcDNA3.1(-)-ALR和pCAT3-S100A11p共转染HepG2细胞,CAT表达活性是单独转染细胞组pCAT3-S100A11p的0.42倍.结论所克隆的S100A11启动子有启动子的转录活性,ALR的转基冈表达具有对S100A11基因的下调作用.
关键词: 人肝细胞再生增强因子 S100A11启动子 -
人肝细胞再生增强因子克隆及序列分析
肝脏再生的细胞及分子生物学机制一直是人们研究的热点课题,目前已知的肝再生相关因子,如肝细胞生长因子, 胰岛素样生长因子I 、II, 转化生长因子等,其作用均缺乏肝特异性[1], 1994年Hagiya等首先报道从新生大鼠肝组织中克隆到一种具热稳定性的促肝增殖刺激因子,称为肝细胞增强因子(ALR)或称肝细胞生成素(HPO), 继而,杨晓明等成功筛选到人肝细胞再生增强因子[2,3].近年来国内外的研究进一步表明,人不同原因的肝损伤时,血清中出现的一种耐热蛋白质小分子对肝再生具刺激作用,分子生物学研究表明其本质即ALR.为进一步研究ALR的生物学活性,利用已知序列,我们克隆到人ALR基因,并对编码区核苷酸进行了序列分析.
关键词: 人肝细胞再生增强因子 真核表达 克隆 序列分析