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Leber遗传性视神经病变基因治疗中ND4基因腺相关病毒的构建及检测
目的 构建人ND4基因腺相关病毒,为Leber遗传性视神经病变(leber hereditary optic neuropathy,LHON)的基因治疗做准备.方法 人工合成人的正常ND4基因,构建rAAV2/2-ND4重组腺相关病毒,进行纯化与浓缩后,用特异扩增ND4基因的引物进行PCR鉴定,用地高辛标记的Hl探针点杂交方法检测病毒液中rAAV2/2-ND4的物理滴度.结果 构建的rAAV2/2-ND4重组腺相关病毒能够特异地扩增出ND4目的基因条带,基因组测定物理滴度为400×109 vg·mL-1,证明该重组腺病毒携带目的基因.结论 本实验成功地构建了人ND4基因腺相关病毒,作为一种先进的载体系统,为今后Leber遗传性视神经病变患者的基因治疗奠定了基础.
关键词: Leber遗传性视神经病变 NADH脱氢酶4 重组腺相关病毒 -
蛋白激酶CK2α'相互作用蛋白NADH脱氢酶4的筛选
目的 研究新的男性不育候选基因蛋白激酶CK2α'在精子发生中的作用机制.方法 以人蛋白激醇CK2α'为诱饵蛋白,用酵母双杂交实验从构建于pACT2质粒的人睾九cDNA文库中筛选CK2α'亚基的相互作用蛋白.结果 核酸序列分析及同源性检索表明,其中一种与NADH脱氢酶4(NADH dehydrogenase 4)有99.0%同源性.结论 NADH脱氢酶是线粒体内参与三羧酸循环的重要酶,也可调节细胞凋亡,深入研究CK2α'与NADH脱氢酶4之间的关系,对了解CK2在精子发生过程中的作用有重要意义.
关键词: 人蛋白激酶CK2α' 酵母双杂交系统 睾丸 NADH脱氢酶4