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免疫共定位文献资料
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接头相关蛋白复合物3δ亚单位与BRD7的相互作用及其功能
目的:观察鼻咽癌密切相关基因BRD7与接头相关蛋白复合物3(AP3)δ亚单位的相互作用及功能.方法:首先构建AP3δ基因真核表达载体pCMV-HA-AP3δ和pEGFP-C2-AP3δ,然后采用GFP介导的细胞荧光实验考察非洲绿猴肾COS7细胞中AP3δ的亚细胞定位;通过细胞荧光共定位和免疫共沉淀实验分析BRD7蛋白与AP3δ蛋白的相互作用;后采用荧光素酶实验观察BRD7与AP3δ对COS7细胞E2F3和CyclinD1活性的影响,半定量逆转录PCR观察转染pcDNA3.1-BRD7的HNE1细胞AP3δ mRNA的表达,以转染空白载体的HNE1细胞为对照.结果:成功构建了pCMV-HA-AP3δ和pEGFP-C2-AP3δ;AP3δ蛋白主要定位于胞质;AP3δ蛋白与BRD7蛋白存在相互作用.AP3δ基因可协同BRD7下调细胞E2F3和CyclinD1启动子活性.在BRD7稳定转染的HNE1细胞中,AP3δ mRNA的表达较转染空白载体组明显上调.结论:AP3δ蛋白与BRD7蛋白存在相互作用,在功能上相互促进.
关键词： BRD7 接头相关蛋白复合物3δ 免疫共定位 免疫共沉淀
