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pRNAT-U6.2表达载体文献资料
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大鼠基质金属蛋白酶抑制因子-1 pRNAT-U6.2 小干扰RNA表达载体的构建
目的:构建大鼠基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)小干扰RNA的真核表达质粒pRNAT-U6.2 siRNA.方法: 依据siRNA设计原则确定以序列447～465 nt、522～540 nt、142～160 nt为TIMP-1 siRNA靶序列, 体外分别合成两端含BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切位点的编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火后克隆于pGEM-T载体, T7和SP6为引物进行PCR鉴定;双酶切pGEM-T将其定向克隆到siRNA表达载体pRNAT-U6.2,用pRNAT-U6.2的插入鉴定引物进行PCR鉴定,阳性重组质粒测序.结果:DNA测序证实合成的并被克隆入真核表达载体pRNAT-U6.2的siRNA插入序列与设计完全符合.结论:TIMP-1 siRNA表达载体构建成功, 为后期研究TIMP-1 pRNAT-U6.2 siRNA作用、意义及效果奠定了实验基础.
