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胡萝卜素生物合成相关基因文献资料
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盐藻cbr基因启动子及其3'-非翻译区序列的克隆
目的:克隆盐藻cbr基因启动子和3'-非翻译区(3'UTR)片段.方法:设计2对引物,通过2轮巢式PCR反应,扩增cbr基因启动子,其中首轮PCR反应使用改良的降落PCR程序,第二轮巢式PCR反应的模板是第一轮PCR产物,使用普通PCR程序;cbr基因3'-UTR片段的克隆采用一对引物,通过一般PCR程序得到.结果:通过巢式PCR得到长约1.1kb的cbr基因启动子片段,DNA测序结果表明碱基序列与文献记载完全相同,无任何碱基突变;克隆的长0.3kb的cbr基因3'-UTR片段经人工比较,与收录的序列吻合,无碱基突变.结论:利用普通Taq酶对用PCR方法克隆得到了盐藻胡萝卜素生物合成相关基因cbr的2个基因表达调控序列;结合使用巢式PCR和改良降落PCR,可以非常有效地克隆具有复杂二级结构的DNA片段;通过两端人工添加的限制序列,将cbr基因启动子和3'-UTR 2个调控片段构建到同一个载体上,形成cbr基因表达盒,为构建转基因盐藻表达载体打下了基础.
关键词： 盐藻 胡萝卜素生物合成相关基因 启动子 3'-非翻译区
