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粘粒载体文献资料
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新疆O139群霍乱弧菌93006菌株基因组文库的构建
目的:构建我国新疆分离O139群霍乱弧菌菌株(93006菌株)的基因组文库,为研究我国O139群霍乱弧菌的来源及其基因组特征提供资料.方法:制备霍乱弧菌高相对分子质量的基因组DNA,用Sau3AI酶将基因组DNA部分酶切成平均大小为32～40kb的片段,将部分酶切并经碱性磷酸酶(CIAP)处理的DNA片段与经XbaI、CIAP、BamHI处理的粘粒载体SuperCos1的载体臂相连接,连接产物经体外包装并转染大肠杆菌XL-Blue1 MR,经氨苄抗性筛选得到阳性克隆,构建霍乱弧菌的基因组文库.结果:该文库共获得了1 200个单克隆,平均插入片段的大小为32kb,空载率为0.05%,相当于9个库容量,从本文库中筛选到任一霍乱弧菌的DNA单拷贝序列的机率为99.98%,该文库能承受7次反复冻溶.结论:成功构建了我国新疆分离O139群霍乱弧菌菌株93006的基因组文库,为进一步克隆霍乱弧菌的基因和研究我国O139群霍乱弧菌的来源奠定了基础.
