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华蟾酥毒基诱导人骨肉瘤细胞 U-2OS 凋亡的实验研究
目的：观察华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞 U-2OS 增殖和凋亡的影响，从而探讨华蟾酥毒基诱导骨肉瘤凋亡的可能机制。方法：应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞 U-2OS 增殖的影响；应用流式细胞术检测华蟾酥毒基及华蟾酥毒基联合泛 Caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 对人骨肉瘤细胞 U-2OS 细胞凋亡的影响；应用蛋白质印迹法检测华蟾酥毒基对凋亡通路相关蛋白表达的影响。结果：四甲基偶氮唑蓝比色法实验结果表明，华蟾酥毒基以时间和浓度依赖的方式抑制 U-2OS 细胞生长。流式细胞术结果显示，100 nM华蟾酥毒基干预后，U-2OS 细胞凋亡率为（46．87±11．23）％，但当华蟾酥毒基与泛 Caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 共同干预后，细胞凋亡率仅为（2．34±0．98）％，与空白对照组及华蟾酥毒基联合 Z-VAD-FMK 组相比，华蟾酥毒基能显著提高细胞凋亡率（P ＜0．01）。蛋白质印迹法结果显示，华蟾酥毒基能够显著提高促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-9的表达。结论：华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞 U-2OS 的生长有显著抑制作用，并能够促使肿瘤细胞凋亡，其作用机制可能与激活 Caspase 依赖的凋亡途径有关。
关键词： 华蟾酥毒基 人骨肉瘤细胞U-2OS 细胞凋亡 Caspase -
华蟾酥毒基对入骨肉瘤细胞U-2OS凋亡的影响及作用机制研究
目的 通过观察华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞U-2OS凋亡的影响,探讨其诱导细胞凋亡的可能机制. 方法 以人骨肉瘤细胞株U-2OS作为实验细胞,MTT法检测采用10、20、50、100、200、400 nmol/L华蟾酥毒基培养24、48、72 h后细胞增殖情况,以单纯U-2OS细胞作为对照组;流式细胞仪检测分别采用100 nmol/L华蟾酥毒基(实验组)及100 nmol/L华蟾酥毒基联合泛半胱氨酸蛋白酶(Caspase)抑制剂Z-VAD-FMK(对照组)培养48 h后细胞凋亡情况,以单纯U-2OS细胞作为空白对照组;用Caspase-3活性检测试剂盒检测20、50、100 nmol/L华蟾酥毒基培养48 h后对细胞Caspase-3活性的影响,以单纯U-2OS细胞作为对照组;Western blot法检测20、50、100 nmol/L华蟾酥毒基培养48 h后对细胞凋亡通路相关蛋白(cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Bcl-2、Bax)表达的影响,以单纯U-2OS细胞作为对照组. 结果 MTT法检测示,同一时间点细胞存活率随华蟾酥毒基浓度增加而显著降低,同一浓度组细胞存活率随时间延长亦显著下降,比较差异均有统计学意义(P＜0.05).流式细胞仪检测显示,实验组细胞凋亡率为46.87％±11.23％,显著高于对照组的2.34％±0.98％及空白对照组的1.04％±0.25％ (P＜ 0.05).20、50、l00 nmol/L组Caspase-3活性分别为1.14.± 0.32、1.31±0.41、1.92±0.54,与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.05); 100 nmol/L组与20、50 nmol/L组比较,差异亦有统计学意义(P＜0.05).Western blot检测结果显示,与对照组相比,各浓度组促凋亡蛋白cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9、Bax均显著上调,抗凋亡蛋白Bcl-2下调,Bax/Bcl-2提高,差异均有统计学意义(P＜0.05);各浓度组随浓度增加也呈相同变化趋势,比较差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 华蟾酥毒基可抑制人骨肉瘤细胞U-2OS的增殖,促使细胞凋亡;其作用机制可能与线粒体介导的凋亡途径有关.
关键词： 华蟾酥毒基 人骨肉瘤细胞U-2OS 细胞凋亡 半胱氨酸蛋白酶3
