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小分子RNA干扰磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基 α基因对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖和侵袭能力的影响
目的 探讨小分子RNA干扰磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基 α(PIK3CA)基因对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 培养人骨肉瘤Saos-2细胞,将细胞随机分为siRNA-PIK3CA组、siRNA对照组和空白对照组,siRNA-PIK3CA组细胞转染siRNA-PIK3CA序列,siRNA对照组细胞转染siRNA对照序列,空白对照组细胞正常培养,不作任何干预.实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中PIK3CA mRNA表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Transwell法检测各组细胞迁移和侵袭能力,Western blot法检测各组细胞中PIK3CA、磷酸肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化-PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化-Akt(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸化-mTOR(p-mTOR)蛋白表达.结果 siRNA-PIK3CA组细胞中PIK3CA mRNA和蛋白相对表达量均低于siRNA对照组和空白对照组(P<0.05);siRNA-PIK3CA组细胞转染后24、48、72、96 h增殖能力均低于siRNA对照组和空白对照组(P<0.05);siRNA-PIK3CA组细胞凋亡率高于siRNA对照组和空白对照组(P<0.05);siRNA-PIK3CA组迁移细胞数和侵袭细胞数均少于siRNA对照组和空白对照组(P<0.05);siRNA-PIK3CA组细胞中PI3K、Akt、mTOR蛋白相对表达量均高于siRNA对照组和空白对照组(P<0.05),而p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量均低于siRNA对照组和空白对照组(P<0.05).siRNA对照组与空白对照组细胞中PIK3CA mRNA和蛋白相对表达量、细胞增殖能力、迁移细胞数和侵袭细胞数及PI3K、Akt、mTORp-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 下调PIK3CA基因可减少人骨肉瘤细胞增殖,抑制细胞迁移及侵袭能力,增加细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.
关键词： 骨肉瘤 小分子RNA干扰 磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基α 细胞增殖 细胞侵袭
