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RNA转录5′末端转换机制文献资料
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常氏肝癌细胞cDNA文库的构建及质量分析
目的利用RNA转录5′末端转换机制(SMART)构建适合免疫筛选的经去分化培养基处理的常氏肝癌细胞cDNA文库.方法通过反转录PCR和长距离PCR获得常氏肝癌细胞的全长cDNA,然后利用SMART cDNA文库构建试剂盒建立经去分化培养基处理的常氏肝癌细胞cDNA文库.结果通过测定,高质量的包含常氏肝癌细胞全长cDNA的cDNA文库得到建立,扩增cDNA文库的滴度高达4.5 × 1010 pfu*ml-1,重组子内平均插入外源基因片段长度在200 bp到4000 bp之间,约1500 bp左右,并且此文库适合免疫筛选.结论结果显示所构建的经去分化培养基处理的常氏肝癌细胞cDNA文库具有很高的质量, 为进一步研究常氏肝癌细胞和筛选相关基因获得cDNA全长奠定了坚实的基础.
关键词： cDNA文库 RNA转录5′末端转换机制 常氏肝癌细胞 长距离PCR 免疫筛选
