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酶联免疫吸附测定试验文献资料
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人参总皂苷多克隆抗体的制备和鉴定
目的 进行人参总皂苷(ginseng total saponins,GTS)多克隆抗体的制备,并用不同方法进行验证.方法 首先在D101大孔吸附树脂纯化的基础上,采用阴阳离子交换树脂的方法进行人参皂苷高纯提取物的制备,香草醛-硫酸比色法估测人参总皂苷的含量;然后通过过碘酸钠法构建人参总皂苷和牛血清白蛋白(BSA)的偶联物作为抗原制备得到人参总皂苷多抗;使用ProteinA/G琼脂糖纯化和抗原柱双纯化抗体;后用免疫细胞化学和生物膜层干涉(biological membrane layer interference,BLI)技术验证抗体.结果 得到高纯度的人参总皂苷;SDS-PAGE表明抗原GTS-BSA偶联物制备成功;ELISA法检测受试组效价为(29.52 ±4.31),亲和树脂纯化后得到较纯多抗;生物膜层干涉技术表明人参总皂苷多抗与人参总皂苷、人参皂苷Re、Rg1、Rh1、Rh2、原人参二醇、F1、化合物K、原人参三醇的亲和力分别为3.99×10-7、4.69×10-9、2.59×10-9、2.40×10-6、1.62×10-4、2.64×10-7、1.66×10-10、1.08×10-7和1.32×10-6;免疫细胞化学(ICC)从细胞学水平上验证了抗体的有效性.结论 人参总皂苷多抗的效价和特异性较高,可为下一步研究人参总皂苷在脑中的分布做好铺垫.
关键词： 人参总皂苷 人参总皂苷多抗 酶联免疫吸附测定试验 生物膜层干涉技术 免疫细胞化学
