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宁心痛颗粒抑制HSP60诱导MyD88-/-THP-1细胞炎症反应
目的 利用siRNA沉默THP-1源性巨噬细胞(Mφ)的髓样分化因子88(MyD88)基因表达,论证MyD88在介导重组人热休克蛋白60 (rhHSP60)诱导Mφp炎症反应中的作用及益气活血方宁心痛颗粒含药血清的抗炎机制.方法 THP-1细胞诱导分化为Mφp,分为空白对照组、模型组、阴性对照组、RNAi组(MyD88-/-Mφ)、含药血清组、RNAi+含药血清组共6组,荧光定量PCR法测定MyD88基因表达,免疫印迹法测定MyD88及磷酸化核因子κB(p-NF-κB)的蛋白表达,酶联免疫法测定TNF-α、IL-6的含量.结果 ①模型组MyD88基因表达升高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P＜ 0.01);RNAi组、含药血清组分别与模型组相比表达均下降,差异有统计学意义(P均＜0.01);含药血清可增强siRNA的抑制作用,RNAi+含药血清组与RNAi组相比,差异有统计学意义.②模型组MyD88及p-NF-κB蛋白表达升高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P均＜ 0.01);RNAi组二者表达均下降,与模型组相比,差异有统计学意义;含药血清可增强siRNA的抑制作用,RNAi+含药血清组与空白对照组相比,差异无统计学意义.③模型组TNF-α、IL-6含量升高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P均＜ 0.01);转染MyD88 siRNA可抑制二者升高,RNAi组与模型组相比,差异具有统计学意义(P均＜ 0.01);含药血清单独使用可抑制二者升高,并可增强siRNA的抑制效果,RNAi+含药血清组与RNAi组相比差异有统计学意义(P均＜0.01).结论 MyD88/NF-κB是人热休克蛋白60诱导THP-1源性Mφ发生炎症反应的关键信号通路,宁心痛颗粒含药血清可通过调控该信号通路发挥抗炎作用.
关键词： 宁心痛颗粒 髓样分化因子88 人重组热休克蛋白60 RNA干扰 炎性反应
