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甘油酸-3-磷酸脱氢酶文献资料
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罗汉果GAPDH基因的克隆及其在基因表达分析中的应用
目的 克隆罗汉果甘油酸-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH,EC 1.2.1.12)基因,分析其在基因表达定量研究中其作为内部参照基因的可行性.方法 采用同源克隆和cDNA末端快速克隆技术,以罗汉果cDNA为模板扩增GAPDH基因的保守区片段.结果 获得了罗汉果GAPDH保守区序列cDNA,命名为SgGAPDH(GenBank注册号:KC410810),序列长度为627 bp,编码209个氨基酸的多肽.系统发育分析表明,SgGAPDH属于植物甘油酸-3-磷酸脱氢酶家族.半定量PCR分析表明罗汉果GAPDH基因在不同组织中表达很稳定.以其作为内部参照基因,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)研究了异戊烯基焦磷酸异构酶(Isopentenyl-diphosphate delta isomerase)的组织表达规律.结果显示SgGAPDH具有良好的扩增效果和重现性.结论 首次克隆了罗汉果GAPDH基因,明确了该序列在基因表达分析中的内参照作用,为罗汉果甜苷生物合成基因的研究提供了条件.
关键词： 罗汉果 甘油酸-3-磷酸脱氢酶 内参基因 实时荧光定量PCR
