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序贯应用他克莫司后处理与康复训练治疗脊髓缺血再灌注损伤的疗效观察
目的 观察他克莫司后处理联合康复训练对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的保护效应.方法 采用随机数字表法将60只雄性SD大鼠分为后处理组、康复训练组、序贯治疗组及模型组.采用经股动脉置管球囊扩张术将各组大鼠制成脊髓缺血模型,模型组在脊髓缺血20 min后行再灌注;后处理组及序贯治疗组在再灌注即刻经左颈总动脉按每千克体重0.5 mg一次性注射他克莫司;康复训练组与序贯治疗组于再灌注1d时开始进行康复训练.于再灌注2d时采用黄嘌呤氧化酶法测定各组大鼠脊髓内超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量;于再灌注7d、14d及28 d时采用BBB评分对各组大鼠后肢运动功能进行评定;于再灌注7d时观察各组大鼠受损脊髓病理改变.结果 再灌注2d时序贯治疗组脊髓组织内SOD活性为(139.94±13.41) U/mg prot,明显高于其他各组水平(均P＜0.05),其中后处理组SOD活性为(122.42±10.36) U/mg prot,显著高于康复训练组[(102.67±13.86) U/mg prot]和模型组[(99.72±12.77) U/mg prot](P＜0.05);序贯治疗组MDA含量为(7.01±0.93) nmol/mg prot,明显低于其他各组水平(均P ＜0.05),其中后处理组和康复训练组MDA含量分别为(8.38±1.03) nmol/mg prot、(8.40±0.55) nmol/mg prot,均显著低于模型组水平[(9.87±1.32) nmol/mg prot](均P＜0.05).再灌注28 d时序贯治疗组、后处理组及康复训练组BBB评分分别为(18.23 ±1.14)分、(16.11 ±1.03)分和(14.80±1.83)分,均显著优于模型组水平[(11.62±1.92)分](均P＜0.01),其中序贯治疗组BBB评分亦显著优于后处理组及康复训练组(均P＜0.05).序贯治疗组大鼠受损脊髓病变程度较轻,后处理组及康复训练组次之,模型组病变程度严重.结论序贯应用他克莫司后处理与康复训练治疗脊髓缺血再灌注损伤具有协同效应,能进一步抑制机体脂质过氧化,促进肢体运动功能恢复.
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他克莫司后处理对缺血再灌注脊髓组织炎性反应的抑制作用
目的 探讨他克莫司后处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后组织炎性反应的抑制作用.方法 成年雄性SD大鼠90只,随机分为假手术(SO)组、缺血再灌注(IR)组和他克莫司后处理(TP)组.采用经股动脉置管球囊扩张制备脊髓缺血模型,缺血20分钟后抽出球囊中液体行再灌注.再灌注15分钟、1、6、24小时切取相应脊髓节段,采用邻联二茴香胺法检测髓过氧化物酶(MPO)活性,再灌注24小时应用干湿差重法测定伤段脊髓组织水含量,同时制备组织切片行原位末端标记法(TUNEL)染色观察神经细胞凋亡.结果 SO组大鼠脊髓组织MPO活性在7.20～8.03 U/mg之间,与之相比IR组大鼠再灌注各时间点MPO活性升高明显(P＜0.01),TP组大鼠再灌注15分钟、1、6、24小时时MPO活性均显著低于IR组(P＜0.01).SO组大鼠脊髓组织水含量为(61.17±1.49)％,再灌注24小时时IR组大鼠高达(69.34±0.91)％,而TP组脊髓组织水含量为(65.09±0.61)％,显著低于IR组(P＜0.01).SO组大鼠脊髓神经细胞凋亡率为(5.44±1.31)％,再灌注24小时时IR组和TP组的凋亡率分别为(32.76±6.67)％和(20.40±5.43)％,TP组显著低于IR组(P＜0.01).结论 他克莫司后处理能抑制缺血脊髓再灌注后的中性粒细胞聚集和组织炎性水肿,减轻神经细胞凋亡,从而发挥神经保护作用.
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不同后处理方式对脊髓缺血再灌注损伤保护作用的比较
目的 比较机械后处理与他克莫司后处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤保护作用的差异.方法 将雄性SD大鼠45只随机分为3组:缺血再灌注(IR)组、机械后处理(MP)组和他克莫司后处理(TP)组.IR组在脊髓缺血20 min后行再灌注；MP组在再灌注即刻行30 s再灌注/30 s缺血,3个循环,余操作同IR组；TP组在再灌注即刻经左颈总动脉一次性注射他克莫司0.5 mg/kg,余操作同IR组.再灌注1、3、7d应用Tarlov评分评价后肢运动功能,采用Western blot法检测脊髓组织半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3表达变化.结果 再灌注1、3、7d MP组运动功能评分值分别为1.75±0.23、2.67 ±0.35和3.06 ±0.27,TP组分别为1.62 ±0.41、2.46±0.33和3.09±0.22,均显著高于IR组(P＜0.05)；再灌注7d时TP组评分值高于MP组,但各时间点两组评分值之间差异无统计学意义(P＞0.05).MP组和TP组脊髓组织Caspase-3蛋白表达在再灌注1、3、7d时分别为0.26±0.03、0.29±0.04、0.28±0.07和0.27 ±0.02、0.30±0.07、0.28 ±0.03,均明显低于IR组(P＜0.05)；各时间点TP组Caspase-3表达与MP组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 两种后处理方式均可有效减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤,且他克莫司后处理具有与经典机械后处理相当的神经保护作用.
