首页 > 文献资料
-
BMP-14诱导骨髓间充质干细胞向肌腱细胞分化的实验研究
目的 探讨应用骨形态发生蛋白14 (BMP-14)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向肌腱细胞分化条件,为获取肌腱组织工程种子细胞提供方法.方法 以新西兰大白兔为实验对象,取BMSCs分离培养.建立2个培养组,分别为实验组(BMP-14诱导培养组)和对照组(自然分化组).Ⅰ型胶原免疫组化、甲苯胺蓝染色,分别使用RT-PCR法检测在不同时间点培养BMSCs的Ⅰ型胶原蛋白和蛋白聚糖mRNA的表达.结果 实验组BMSCs爬片免疫组化染色中可见蛋白聚糖及Ⅰ型胶原蛋白染色阳性,对照组呈阴性.RT-PCR结果显示经BMP-14诱导后BMSCs中蛋白聚糖Ⅰ型胶原蛋白的表达明显高于对照组.结论 BMP-14可诱导BMSCs向肌腱细胞分化.
-
BMP-14联合Noggin shRNA共转染对脂肪来源干细胞成骨分化能力的影响
目的 在体外环境下同时下调细胞中Noggin基因和增加BMP-14基因,观察对脂肪来源干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)成骨分化能力的影响.方法 取健康成年SD大鼠5只,体质量250～300 g,采用Ⅰ型胶原酶消化法获取原代ADSCs,体外培养、扩增.使用慢病毒载体将目的基因转染大鼠ADSCs,根据目的基因不同将实验分为3组,A组为空载体病毒Lv-增强型绿色荧光蛋白转染对照组,B组为Lv-BMP-14转染组,C组为BMP-14+Noggin shRNA转染组.分别于转染后3、7、14d,采用实时荧光定量PCR检测BMP-14及成骨相关基因[Ⅰ型胶原、ALP、骨钙素(osteocalcin,OCN)]的表达,转染后14 d采用茜素红染色鉴定其成骨分化能力.结果 转染后3d,各组BMP-14 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05);7、14d,C组BMP-14 mRNA相对表达量高于A、B组,B组高于A组,比较差异均有统计学意义(P＜0.05).转染后3d,C组各成骨相关基因mRNA相对表达量显著高于A、B组(P＜0.05);A、B组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).转染后7、14 d,C组各成骨相关基因mRNA相对表达量显著高于A、B组,B组高于A组,除转染后7dA、B组间Ⅰ型胶原mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05)外,其余各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).转染后14 d茜素红染色示,A、B、C组钙结节量呈递增趋势.结论 BMP-14具有增强大鼠ADSCs向成骨细胞分化的能力;沉默细胞中的Noggin基因、联合BMP-14基因共同作用于大鼠ADSCs,其体外成骨分化能力明显强于BMP-14单基因转染,两者有显著的协同作用.
-
BMP-14转染脂肪来源干细胞后与软骨细胞共培养的实验研究
目的 研究BMP-14与软骨细胞共同诱导脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)向软骨细胞分化是否具有协同作用,优化软骨组织工程种子细胞来源.方法 取2只雄性新西兰大白兔(体重1.5、2.0 kg)关节软骨和皮下脂肪组织,分离、培养软骨细胞和ADSCs,取第3代细胞进行实验.对ADSCs行成骨(茜素红染色)、成软骨(阿利新蓝染色)和成脂(油红O染色)诱导鉴定.测定Ad-巨细胞病毒-BMP-14-内部核糖体进入位点-人源化海肾绿色荧光蛋白l转染的佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)并以其转染ADSCs.实验分为5组:A组,采用Transwell小室将BMP-14转染的ADSCs与软骨细胞共培养(1∶1)；B组,采用Transwell小室将未转染的ADSCs与软骨细胞共培养(1∶1)；C组,单纯BMP-14转染的ADSCs培养；D组,单纯软骨细胞培养；E组,单纯ADSCs培养.培养3周后,取细胞采用阿利新蓝法检测糖胺聚糖(glycosaminoglycan,GAG)含量,Western blot检测BMP-14和Ⅱ型胶原蛋白表达,RT-PCR检测Sox-9基因表达.结果 培养细胞经鉴定提示为ADSCs.倒置荧光显微镜观察示,MOI值为150时转染效果好.A、C组GAG含量、BMP-14和Ⅱ型胶原蛋白表达以及Sox-9基因表达均明显高于其余3组,A组高于C组,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);B、D组均明显高于E组(P＜0.05),B、D组间差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 BMP-14与软骨细胞能共同诱导并促进兔ADSCs向软骨细胞分化,两者之间具有协同作用.
