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同源异型核基因1过表达诱导上皮-间充质转化促进乳腺癌细胞转移能力的研究
目的 观察同源异型核基因1(Prrx1)过表达对乳腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)作用及迁移能力的影响.方法 用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)从MCF-7、MDA-MB-468、BT-549乳腺癌细胞中筛选出Prrx1低表达细胞株.用Prrx1过表达慢病毒载体感染筛选出的Prrx1低表达乳腺癌细胞株,Western blot验证感染成功后,观察感染前后乳腺癌细胞形态变化.Real-time PCR检测感染对乳腺癌细胞E-钙黏蛋白及波形蛋白表达的影响.Transwell细胞迁移实验检测Prrx1对乳腺癌细胞迁移能力的影响.结果 乳腺癌MCF-7、MDA-MB-468、BT-549细胞的Prrx1 mRNA的相对表达量分别为15.05±0.18、11.78±0.42、7.98±0.37,因此3种乳腺癌细胞中MCF-7细胞Prrx1表达量低,Prrx1过表达慢病毒载体感染成功后,MCF-7细胞形态由多角形变为长梭形.Real-time PCR实验结果显示,感染后Prrx1 mRNA在实验组、空白对照组、病毒对照组的相对表达量分别为2.16±0.07、10.18±0.07、10.20±0.07,Prrx1 mRNA水平是感染前的259.57倍(t=227.100,P=0.000) ,两对照组比较差异无统计学意义 (t=1.315,P=0.202) .感染后E-钙黏蛋白mRNA在实验组、空白对照组、病毒对照组的相对表达量分为别4.00±0.02、3.56±0.02、3.51±0.05,E-钙黏蛋白mRNA水平是感染前的0.71倍(t=6.007,P=0.000),而两对照组比较差异无统计学意义(t=0.730,P=0.476).感染后波形蛋白mRNA在实验组、空白对照组、病毒对照组的相对表达量分别为8.79±0.42、10.18±0.06、9.97±0.05,波形蛋白mRNA水平是感染前的2.27倍(t=11.900,P=0.000),两对照组比较差异无统计学意义(t=2.052,P=0.057).Transwell实验显示Prrx1过表达组发生迁移的细胞数[(73.40±10.21)个]高于病毒对照组[(44.60±8.24)个]及空白对照组[(45.60±6.62)个],差异有统计学意义(t=6.837,P=0.000),空白对照组和病毒对照组差异无统计学意义(t=0.295,P=0.772).结论 Prrx1基因过表达可诱导乳腺癌细胞发生EMT使其迁移能力增强.
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同源异型核基因1诱导乳腺癌细胞发生上皮-间充质转化对三苯氧胺耐药的研究
目的 观察同源异型核基因1 (Prrx1)过表达诱导乳腺癌细胞发生上皮-间充质转化(EMT)对三苯氧胺(TAM)耐药的影响.方法 脂质体转染法转染Prrx1低表达细胞株MCF-7细胞,实验组细胞为转染Prrx1基因的MCF-7细胞,空白对照组为转染空白载体的MCF-7细胞,阴性对照组为MCF-7细胞,倒置荧光显微镜观察转染效率,Western blot验证转染成功,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Prrx1对E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)及波形蛋白(Vimentin) mRNA表达水平的影响后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测3组细胞对三苯氧胺的耐药性.结果 转染后荧光效率达80％以上,实验组Prrx1蛋白表达水平明显高于对照组,且差异有统计学意义(P=0.000),两对照组之间差异无统计学意义(P =0.326).Prrx1 mRNA在阴性对照组、空白对照组、实验组中CT值分别为13.502±0.360、13.770±0.642、5.203±0.231,实验组Prrx1 mRNA表达水平为阴性对照组的320倍;E-cad mRNA在阴性对照组、空白对照组、实验组CT值分别为18.471 ±0.076、18.611±0.108、19.394±0.400,实验组E-cad mRNA表达水平为阴性对照组的0.560倍;Vimentin mRNA在阴性对照组、空白对照组、实验组CT值分别为19.422±0.082、19.484 ±0.021、17.817 ±0.061,实验组Vimentin mRNA表达水平为阴性对照组的3.030倍.三苯氧胺作用24h后,实验组半数抑制浓度(IC50)明显高于阴性对照组(P =0.000)和空白对照组(P =0.000),差异有统计学意义,而阴性对照组和空白对照组之间差异无统计学意义(P=0.150).结论 Prrx1过表达可诱导MCF-7细胞发生EMT现象促进对三苯氧胺产生耐药.
