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VTCN1基因沉默对膀胱癌HT-1376细胞增殖和转移的影响
目的 通过RNA干扰技术下调VTCN1基因在人膀胱癌HT-1376细胞株中的表达,观察VTCN1基因表达下调后对膀胱癌细胞生物学行为的影响.方法 将针对VTCN1基因的小干扰RNA(siRNA)序列重组入真核表达载体中构建pU-VTCN1-siRNA,转染至膀胱癌HT-1376细胞株中,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测转染pU-VTCN1-siRNA后的HT-1376细胞中VTCN1在基因和蛋白表达.采用流式细胞仪分析转染pU-VTCN1-siRNA后的HT-1376细胞的细胞周期,应用Transwell侵袭小室模型观察转染pU-VTCN1-siRNA后HT-1376细胞侵袭力.结果 转染pU-VTCN1-siRNA后的HT-1376细胞中,VTCN1的基因和蛋白表达水平显著下降(P＜0.05),细胞周期被阻滞在G1期,G1期细胞从37.3％上升到74.6％,而S期细胞由46.36％下降到8.9％(P＜0.05),Transwell侵袭实验显示侵袭细胞数由空载组(278 ±42)个和空白组(293±460个下降为实验组的(39±6)个,体外侵袭能力明显下降(P＜0.05).结论 通过siRNA技术下调VTCN1基因表达能抑制HT-1376细胞增殖和侵袭能力.
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ShRNA靶向沉默VTCN1基因对鼻咽癌细胞的影响
目的:通过研究VTCN1在鼻咽癌细胞中的表达情况,采用慢病毒载体靶向沉默VTCN1基因体外对人鼻咽癌细胞的抑制作用.方法:通过RT-PCR技术和蛋白质免疫印迹法,检测人鼻咽癌细胞株CNE1,HONE-1,NP65和HNE2的VTCN1表达情况,筛选出VTCN1表达量多的细胞株,进行后续的实验.用脂质体lipofectamine2000将沉默VTCN1的慢病毒载体转染高表达VTCN1的HNE2细胞,筛选出稳定细胞株;采用RT-PCR技术和蛋白质免疫印迹法检测VTCN1 ShRNA对VTCN1基因的靶向沉默效率;ckk-8、基质胶侵袭实验检测VTCN1沉默后HNE2细胞增殖和侵袭的影响;蛋白质免疫印迹实验检测VTCN1沉默后,JAK/STAT通路主要蛋白的磷酸化水平的变化.结果:VTCN1靶向沉默的细胞VTCN1表达受到显著抑制;RT-PCR和蛋白质免疫印迹法检测发现稳定转染ShRNA后,VTCN1的mRNA表达水平和蛋白表达水平均明显下降(P＜0.05);转染VTCN1 ShRNA后HNE2细胞的增殖和侵袭能力均明显降低(P＜0.05);VTCN1沉默后,JAK、STAT磷酸化水平明显下降(P＜0.05).结论:VTCN1 ShRNA能有效沉默VTCN1的表达,显著抑制HNE2细胞的增殖和侵袭,推测其与下调JAK/STAT信号通路蛋白的活化相关.
关键词： 鼻咽癌 RNA干扰 VTCN1 细胞增殖与侵袭 JAK/STAT信号通路
