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体外诱导可分解草酸成人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的研究
目的 体外培养并转染了产甲酸草酸杆菌(Ox.F)草酸分解基因frc和oxc的成人骨髓间充质干细胞(hMSCs-frc-oxc),并诱导其向肝细胞分化.方法 体外培养转染了草酸分解基因的P4代hMSCs,并通过含40 μg/L肝细胞生长因子(HGF)± 10 μg/L胰岛素样生长因子(FGF)-4所组成的培养液诱导其向肝细胞分化.在分化过程中通过显微镜观察分化细胞形态变化.以实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、Western blot技术和免疫细胞化学技术检测细胞内肝细胞特异标志物甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)、细胞角蛋白-18(CK-18)和目的基因frc、oxc及其产物融合蛋白myc-FCOAT、flag-OCOAD的表达.成熟肝细胞L-02和转染了空病毒载体的hMSCs (hMSCs-vector)分别作为阳性对照组和阴性对照组.结果 可分解草酸的hMSCs-frc-oxc在体外可成功培养,细胞经上述培养液诱导后,细胞形态逐渐变短,变成多角形.Real-time PCR可检测在诱导组细胞中AFP、ALB、CK-18和草酸分解基因frc、oxc表达,而未经诱导细胞组AFP、ALB、CK-18则未表达,未转染目的基因的细胞组frc、oxc未见表达.免疫细胞化学检测诱导28 d后细胞可表达ALB,未经诱导细胞组ALB表达呈阴性.Western blot技术检测诱导第14、28天细胞中AFP、CK-18表达较未诱导组明显增加(P＜0.05),与成熟肝细胞相似,并表达myc-FCOAT、flag-OCOAD,而未转染目的基因细胞组表达呈阴性.结论 含有草酸分解基凶的hMSCs-frc-oxc体外通过一定条件诱导可以向肝细胞方向分化,经诱导分化后细胞仍可成功表达frc和oxc基因及其产物.
