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微小RNA-130b通过靶向调控磷酸酯酶与张力蛋白同源物/蛋白激酶B通路对胃癌细胞BGC-823增殖凋亡的影响
目的 探讨微小RNA-130b(miR-130b)对胃癌细胞BGC-823增殖凋亡的影响及作用机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-130b在38例胃癌患者肿瘤组织及癌旁组织中的表达;瞬时转染miR-130b模拟物/抑制剂、第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)小干扰RNA(siRNA)进入胃癌细胞,检测细胞增殖、周期、凋亡以及凋亡相关蛋白变化情况;双荧光素酶报告基因实验验证miR-130b靶向调控PTEN,Western blot检测PTEN/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白表达变化.结果 miR-130b在胃癌肿瘤组织中表达水平显著高于癌旁组织(8.048±0.508比2.689±0.243,P＜0.01);过表达miR-130b促进肿瘤细胞增殖(1.722±0.122比0.910±0.095,P＜0.01),下调miR-130b抑制肿瘤细胞增殖(0.369±0.032比1.023±0.072,P＜0.01),下调PTEN逆转miR-130b抑制剂的细胞增殖抑制作用(0.781±0.032比0.369±0.032,P＜0.01);下调miR-130b增加肿瘤细胞凋亡率[(20.54±1.56)％比(12.86±1.35)％,P＜0.05]和细胞周期G1期细胞数量[(50.50 ±0.78)％比(35.50 ±0.64)％,P＜0.01],并且降低凋亡相关蛋白表达;miR-130b+ PTEN-3'端非编码区(3'UTR)-wt荧光素酶活性较对照组显著降低(0.469±0.099,P＜0.01),而miR-130b+ PTEN-3'UTR-mut荧光素酶活性较对照组无明显变化(0.920±0.045,P＞0.05),miR-130b+ 3'UTR-wt与miR-130b+ 3'UTR-mut之间荧光素酶活性差异有统计学意义(0.469 ±0.099比0.920±0.045,P＜0.01);抑制miR-130b上调PTEN表达(2.067±0.120,P＜0.01),下调磷酸化Akt (p-Akt)表达(0.501±0.115,P＜0.05),过表达miR-130b下调PTEN表达(0.526±0.157,P＜0.05),上调p-Akt表达(1.860±0.222,P＜0.05),总的Akt表达水平无明显变化.结论 miR-130b通过靶向调控PTEN/Akt通路,影响胃癌细胞BGC-823的增殖和凋亡.
