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EFNA2基因文献资料
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鸡耳蜗EFNA2基因RNAi慢病毒载体的构建及其靶基因离体沉默效率
目的 构建鸡耳蜗EFNA2基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,在离体培养原代鸡听神经细胞中鉴定其沉默效率.方法 针对鸡EFNA2基因序列设计特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)靶点,构建慢病毒pFU-GW-iRNA 载体,将筛选所得有效短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体在293T细胞中包装成病毒颗粒,随后将其感染离体培养原代鸡听神经细胞,后采用Real-time PCR检测靶基因的沉默效率.结果 PCR克隆鉴定及测序结果显示所构建的shRNA慢病毒载体正确无误,包装病毒后的滴度为2.0×109 TU/ml,分别命名为LV-GFP-EFNA2-shRNA-l、LV-GFP-EFNA2-shRNA-2和LV-GFP-EFNA2-shRNA-3.ShRNA慢病毒颗粒感染目的 细胞后,EFNA2基因的mRNA表达量较阴性对照载体慢病毒感染组分别下降了76.11%、61.87%和68.44%.结论 本研究成功构建了鸡EFNA2基因的RNAi慢病毒表达载体,并能在离体培养的原代鸡听神经细胞中有效沉默靶基因.
