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壳聚糖包裹siRNA在小鼠牙胚发育研究中的应用
目的:探索局部注射siRNA对小鼠牙胚生长发育产生影响的实验方法.方法:选择健康新生昆明小鼠作为实验对象,将阴性对照siRNA进行壳聚糖(chitosan,CS)包裹,分别将其注入小鼠的两个不同部位:①.腹腔注射组,将Cy5.5标记的CS包裹的siRNA纳米粒注射于新生昆明小鼠腹腔,于不同时间点在动物活体成像仪下观察荧光分布情况.②颌骨局部注射组,将Cy5.5标记的siRNA/CS纳米粒局部直接注射于新生小鼠左上颌第一磨牙牙胚,通过动物活体成像结合冰冻切片观察荧光分布情况,验证局部注射方法的可行性.结果:在腹腔注射组,随着时间延长,荧光开始在腹腔内扩散,随后在腹腔内淬灭,荧光始终局限于腹腔,腹腔外没有观察到荧光;颌骨局部注射组通过活体动物成像显示注射的牙胚处有荧光,进一步的冰冻切片验证在牙胚处有荧光,且牙胚结构无明显损伤.结论:本实验将CS包裹siRNA纳米粒技术应用于牙胚发育的相关研究,首次成功构建了新生昆明小鼠牙胚局部注射siRNA的方法,为研究牙胚发育相关基因的作用开辟了新的途径.
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基于活体成像技术的裸鼠卵巢癌休眠模型的建立
目的 建立基于活体成像的裸鼠卵巢癌休眠模型并利用小动物活体成像技术验证休眠细胞的存在.方法 采用慢病毒载体对人卵巢癌skov-3细胞稳定转染萤火虫荧光素酶基因(firefly luciferase gene),经筛选获得稳定表达荧光素酶基因的人卵巢癌细胞株(skov-3/luc).将skov-3/luc细胞接种至裸小鼠右侧腋部皮下,成瘤后观测荧光并做肿瘤切除手术,术后的裸鼠再常规喂养8周后选取接种肿瘤处肉眼未见肿瘤组织生长的裸鼠进行活体成像观察,显示接种处肿瘤细胞荧光阳性者,即认为卵巢癌裸鼠休眠模型建立成功.结果 筛选到了稳定表达Luc的skov-3/luc细胞株;成功构建了基于活体成像的裸鼠卵巢癌休眠模型,并利用小动物活体成像技术验证了裸鼠体内卵巢癌休眠细胞的存在.结论 利用活体成像技术构建的裸鼠卵巢癌休眠模型为研究肿瘤休眠的机制及诱导和维持肿瘤细胞休眠的方法提供了理想的实验动物模型.
