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液氮快速冻存法保存人羊膜抗冻剂筛选研究
目的 观察不同抗冻剂预处理人羊膜后快速液氮保存的效果.方法 剥取剖宫产胎膜中羊膜,分别用生理盐水(C)组、DMEM/甘油(D1)组、DMEM/甘油/二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO) (D2)组、DMEM/甘油/DM-SO/海藻糖(D3)组预处理并标记后直接投入液氮中保存.于冻存第1、3、6、12个月取出,行台盼蓝、苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,计算羊膜上皮细胞存活百分率(存活率)、上皮细胞结构(细胞结构),并与新鲜羊膜比较.结果 C、D1组随着保存时间延长,存活率1>3>6>12个月(P<0.05),细胞结构破坏也逐步加重.D2组内存活率1>3个月(P<0.05),3>6>12个月(P>0.05),保存1、3个月的羊膜细胞结构接近新鲜羊膜,6、12个月有轻微改变.D3组内各时间点存活率有下降(P>0.05),细胞结构变化不明显.各组各时间点羊膜细胞存活率:新鲜羊膜>D3>D2>D1>C(P<0.05;D3组保存1个月与新鲜羊膜比较,P>0.05).D2、D3组各时间点存活率>新鲜羊膜的70%.结论 DMEM/甘油/DMSO/海藻糖抗冻剂预处理的羊膜,经快速液氮冻存1年后的效果好.