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miR-99a抑制物对骨肉瘤细胞生物行为学的影响
目的:探索miR-99a在骨肉瘤中的表达情况及其对骨肉瘤细胞生物学行为特性的影响.方法:收集7例骨肉瘤组织及瘤旁骨组织,RT-PCR检测并比较miR-99a表达情况;RT-PCR技术检测miR-99a在骨肉瘤细胞系143B、MG-63和U2OS中的相对表达量,以人成骨细胞系hFOB1.19作为对照比较;RT-PCR检测hepG2、lovo、A549和MCF-7中的miR-99a相对表达量,以143B作对照比较.培养人骨肉瘤细胞系143B,瞬时转染miR-99a in-hibitor后,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕试验检测细胞迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭,Western Blot检测RECK、MMP-2、MMP-9蛋白的表达情况.结果:miR-99a在7例骨肉瘤组织中的相对表达量(0.81±0.06)要明显高于瘤旁骨组织(0.48±0.06) (P＜0.01).3组骨肉瘤细胞系miR-99a表达量均高于人成骨细胞hFOB1.19,差异有统计学意义(P＜0.01);骨肉瘤细胞系中miR-99a相对表达明显高于四种非骨肉瘤细胞系(P＜0.05).miR-99a inhibitor转染组细胞增殖速率显著减慢,低于inhibitor-NC组和空白组(P＜0.05);转染组早期凋亡和晚期凋亡均未明显增加(P＞0.05);转染组细胞迁移能力明显受到抑制;转染组143B细胞穿过小室底膜的数目明显低于inhibitor-NC组和空白组(P＜0.05);转染组RECK蛋白表达上调,MMP-2和MMP-9蛋白表达下调.结论:miR-99a在骨肉瘤组织和细胞系中呈现高表达,下调miR-99a能抑制骨肉瘤细胞系143B增殖、侵袭和转移能力,其机制可能是通过调控RECK/ MMP-2蛋白表达而实现的.
关键词： 骨肉瘤 微小RNA-99a 侵袭转移 回复引导半胱氨酸丰富蛋白 基质金属蛋白酶
