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干酪乳杆菌细胞壁成分诱导小鼠冠状动脉炎的超抗原机制
目的 探讨干酪乳杆菌细胞壁成分(lactobacillus casei cell wall extract,LCWE)诱导小鼠产生冠状动脉炎的超抗原机制.方法 4周龄 Balb/c 小鼠 126 只,随机分为实验组(63只)和对照组(63只),分别于腹腔注射0.5 ml LC-WE 或等体积 PBS 溶液(对照组),注射前及注射后3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、5 d、10 d、28 d分批处死,制备脾单个核细胞悬液,并留取心脏病理标本.检测各组注射前及注射后不同时间小鼠脾单个核细胞 TCR Vβ2、4、6mAb 的表达,以及脾单个核细胞悬液CD4+T 细胞 CD69 的阳性率.结果 ①病理学检查显示,实验组小鼠冠状动脉炎损害发生率为 92.10%,对照组为0,差异有显著性意义.②实验组小鼠在注射 LCWE 后 3 h,脾单个核细胞表达 TCR V/32、4、6 的 CD4+T 细胞百分比均明显增加,3 d 达高峰,其后逐渐消退,注射 LCWE 后3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、5 d、10 d 与注射前比较及与 PBS组比较,差异均有极显著性意义(均P<0.01).③实验组小鼠脾单个核细胞 CD4+T 细胞 CD69 的阳性率,在 LCWE 注射后 3 h开始升高(19.32%),12 h达高峰(38.80%),以后明显下降,1 d为9.89%;与对照组比较,差异均有极显著性意义(均P<0.01).结论 国产 LCWE 具有超抗原活性特征.可刺激表达 TCR VβT 细胞的增殖和引起淋巴细胞早期活化.LCWE 单次腹腔注射诱导 Balb/c 小鼠产生的冠状动脉炎病理损害是通过超抗原机制实现的.
关键词： 干酪乳杆菌细胞壁成分 TCR Vβ CD69 冠状动脉炎 -
建立九色流式检测人外周血中TCR Vβ淋巴细胞亚群活化及凋亡方案
目的 建立九色流式方法检测人外周血中TCR Vβ淋巴细胞亚群活化及凋亡状态的方案.方法 用细胞膜表面抗体CD3、CD4、CD8、CD95、CD69、磷脂结合蛋白Annexin-V、TCR Vβ抗体试剂盒和细胞核染料DAPI建立九色流式染色方案.用1例健康成年人外周血标本分别进行抗体滴度实验、适检测电压选择、单色染色和缺一色染色,确定条件后,对8例健康成年人外周血标本进行检测分析.结果 根据细胞分群情况选择了合适的抗体滴度和检测电压,单色染色和缺一色试验确定了适宜补偿,建立了九色流式检测人外周血中TCR Vβ淋巴细胞亚群活化及凋亡状态的方案;采用此方案检测的8例健康成年人标本,TCR Vβ亚群分布与TCR Vβ抗体试剂盒说明书及文献报道分布一致,并能分析各TCR Vβ亚群细胞活化及凋亡状态.结论 建立的九色流式方案可检测人外周血中TCR Vβ淋巴细胞亚群活化及凋亡状态,操作简便,结果可靠.
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葡萄球菌D型肠毒素超抗原TCR Vβ结合位点的研究
目的: 研究金黄色葡萄球菌D型肠毒素(SED)超抗原与TCRVβ结合的关键位点.方法: 利用定点突变技术, 构建了6种SED的突变体. 用3 H-TdR掺入法检测这些突变体促进T细胞增殖的活性. 对促增殖活性降低的突变体, 进一步用流式细胞仪检测他们与MHC-Ⅱ类分子结合的活性和其TCRVβ特异性.结果: 发现N23位氨基酸是SED与人TCRVβ5结合的关键位点.H26位氨基酸可能是SED与人的其他TCRVβ(除TCRVβ5、 TCRVβ8和TCRVβ12.1)结合的关键位点, 值得进一步研究.结论: 本结果丰富了对超抗原免疫识别的认识, 为葡萄球菌超抗原相关疾病的防治, 以及基于超抗原设计新的抗肿瘤免疫制剂提供了理论依据.
关键词： 超抗原 金黄色葡萄球菌D型肠毒素 TCR Vβ 结合位点
